兔子宫成纤维细胞的应用

背景^[1-3]

兔子宫成纤维细胞是一种常用的细胞系，用于研究女性生殖系统的发育和生理功能。该细胞来源于雌性未受精的兔子子宫内膜组织，经过体外培养、增殖和分化而成。

兔子宫成纤维细胞

兔子宫成纤维细胞分离自子宫组织，是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。其特点如下：

形态：成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。

功能：成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化。它对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。

体外培养特性：刚分离的子宫成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。细胞融合后，会彼此连接成网状，细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

主要特征：它是子宫的重要细胞组成，在体外易于培养；在子宫损伤后能修复和重塑子宫；在子宫炎症时能有效控制炎症扩散。

兔子宫成纤维细胞操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO),90%;优质胎牛血清,10%。

2)兔子宫成纤维细胞培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3)兔子宫成纤维细胞冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。

二.兔子宫成纤维细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。*天换液并检查细胞密度。

2)兔子宫成纤维细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。产品仅供科研使用

对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

兔子宫成纤维细胞可以用于PGE2和IL1-β对体外培养兔子宫韧带成纤维细胞增殖的影响

通过体外培养兔子宫韧带成纤维细胞,研究前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)和白细胞介素1-β(interleukin1-β,IL1-β)二者在单一和联合应用时,对体外培养的兔子宫成纤维细胞的增殖有何种影响。

研究方法1利用组织块法体外培养兔子宫韧带成纤维细胞,并通过形态学及免疫组化测定其Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白含量对其进行鉴定。

2用不同浓度的炎症因子PGE2(25、50、100、500、1000ng/m1)和IL1-β(10、20、50、100、200ng/ml)刺激细胞增殖,以常规培养组为对照,通过MTT法对炎症因子对细胞增殖的作用进行测定。

3应用Excel2003录入数据,以均数士标准差(x±s)的形式来表示各组数据的平均灰度值,采用SPSS16.0软件包进行数据分的统计分析。采用单因素方差分析法和LSD-t检验法分析各组间资料,检验水准：α=0.05。

结果：1利用组织块法成功在体外培养兔子宫韧带成纤维细胞,该细胞的外在形态与典型的成纤维细胞形态相似,符合成纤维细胞的形态学特征,采用免疫组化方法测定该细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达,其结果符合韧带细胞的特性。

2单独应用时,100ng/ml的PGE2和20ng/ml的IL1-β分别为各自最有效的促增殖浓度(P<0.05)；将浓度为100ng/ml的PGE2(?)(?)20ng/ml的IL1-β联合应用以刺激子宫韧带成纤维细胞的增殖,该条件下的韧带成纤维细胞增殖活性高于单因子浓度作用组(P<0.05)。高于各自最适浓度后,PGE2和IL1-p的促增殖作用不再与其浓度成正相关性。

结论：PGE2与IL1-β在适当浓度内单独或联合应用,均能有效的对体外培养的子宫韧带成纤维细胞的增殖起到促进作用,但这种作用并不时刻与炎症因子的浓度成正相关性。

参考文献

[1]Activated T-cells and pro-inflammatory cytokines differentially regulate prostaglandin E2 secretion by mesenchymal stem cells..Biochemical and Biophysical Research Communications,2012

[2]Prostaglandin E2(PGE2)in Portal Blood in Patients with Pancreatic Tumor—A Single Institution Series.Piotr Hogendorf;;Adam Durczyński;;Anna Kumor;;Janusz Strzelczyk.Journal of Investigative Surgery,2012

[3]Anorectal symptoms before and after laparoscopic sacrocolpoperineopexy for pelvic organ prolapse..International Urogynecology Journal,2012

[4]Pelvic organ prolapse and collagen-associated disorders.Karin Lammers;;Sabrina L.Lince;;Marian A.Spath;;Léon C.L.T.Kempen;;Jan C.M.Hendriks;;Mark E.Vierhout;;Kirsten B.Kluivers.International Urogynecology Journal,2012

[5]白杨.PGE2和IL1-β对体外培养兔子宫韧带成纤维细胞增殖的影响[D].郑州大学,2012.