鸡IgY多克隆抗体制备

背景^[1-7]

鸡IgY多克隆抗体制备是对鸡进行免疫，激活其B淋巴细胞，并在其分泌的抗体转移到卵黄后，通过每月其产的鸡蛋进行纯化获取纯化的抗体。

鸡IgY多克隆抗体制备优势：制备体系较成熟、所需抗原量很小，单位产量高（单只鸡一月可产1.5-3g IgY）、可依赖于鸡每月的产蛋来维持长期的低成本生产制备、由于亲缘关系较远，因而针对很多哺乳动物蛋白有更好的特异性和更低的交叉反应概率、多抗的一般优势。多克隆抗体是由免疫的宿主通过不同来源（多克隆）的B细胞分泌产生的抗体。一组多克隆抗体应识别同一抗原，同时由于是多克隆，所以往往对同一抗原的多个不同表位进行识别。

技术原理：抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。一般而言，抗体按靶位点不同主要分为单克隆抗体和多克隆抗体，由多个B淋巴细胞克隆产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体。

原有两个基本特性，即抗原性和免疫原性。有抗原性的物质不一定有免疫原性，所以由此引出半抗原和完全全抗原，半抗原必须经过经过一定的改造（偶联蛋白载体BSA，OVA或者HSA等大分子物质）方能成为完全。一般而言完全抗原分子量越大（大于10KDa），结构越复杂引起免疫反应的能力也就越强。

抗体就是能与特异性抗原结合的免疫球蛋白，抗体一般分为多克隆抗体和单克隆抗体，多克隆抗体能与抗原的多个表位结合。

鸡IgY多克隆抗体制备过程：

1.免疫原的制备

普通的大分子蛋白，通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白，纯化鉴定后可直接作为免疫原。

小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原，常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。

2.免疫动物准备

选择动物时应考虑抗原和免疫动物的种属差异，种系相近会影响免疫效果，一般要求动物适龄，健康，体重符合要求。添加佐剂可帮助抗原在注射部位缓慢释放，增加免疫效果，常用佐剂为弗氏不完全佐剂。

初次免疫后要经过2~3次以上的加强免疫以形成较高水平的IgG抗体。初次免疫和再次免疫之间，鸡一般间隔10~14天。在每次加强免疫后，进行抗血清效价测定，当效价达到理想状态时，便采集免疫鸡蛋。

3.免疫鸡蛋的收集

4.抗体的纯化与鉴定

得到的抗体需要进一步的纯化，利用偶联了抗原的亲和柱进行层析，具有高效，特异性强，纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。

5.免疫抗体的保存

建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定，在-80℃～-20℃可以保存约5年而不会影响效价，而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。

应用^[8]

作为鸡类疾病的鉴定实验中的兔抗原以制备兔抗禽类卵黄抗体IgY的二级抗体：

比如在19种抗禽类IgY多克隆抗体的制备和标记的实验中用纯化的鸡IgY抗体作为抗原对兔进行系统免疫制备抗血清。抗血清纯化得到的兔抗禽类卵黄抗体IgY的二级抗体并对其中的进行了辣根过氧化物酶标记。该辣根过氧化物酶标记兔抗禽类卵黄抗体IgY的二级抗体便可作为检测鸡血中相应抗体的二抗。

参考文献

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[8]杨帆.19种抗禽类IgY多克隆抗体的制备和标记[D].中国协和医科大学,2008.