兔单克隆抗体制备服务

背景^[1-7]

兔单克隆抗体制备服务基于噬菌体展示技术平台，构建了兔单克隆抗体可以为客户提供专业的兔单克隆抗体制备服务。兔抗体库是兔源多克隆抗体和单克隆抗体非常优质的来源，产生的抗体拥有高特异性、高活性和高亲和力的优点。

因为兔和啮齿类动物中常用的大鼠、小鼠进化关系较远，啮齿类单克隆抗体（以及从转入了人体免疫球蛋白基因的转基因小鼠中制备的人单克隆抗体）对啮齿类和人体抗原共同的抗原决定簇不起作用，而兔抗体却往往可以很好的辨识啮齿类和人体抗原共同抗原决定簇，克服了抗体生产中这一障碍。噬菌体展示技术对表形（蛋白质）和基因型（cDNA）同时进行筛选，因而由此法制备的兔单克隆抗体具有更多的优势。此外，和兔杂交瘤技术相比，我们公司的噬菌体展示平台可以同时生产更多数量的单克隆抗体。

噬菌体展示系统是在大肠杆菌中实现的，而兔Fab抗体片段对大肠杆菌却是有毒性的。通常有两种方法可以避免兔Fab抗体片段在细菌细胞中表达的毒性、不溶性以及表达量低的问题。一是链接兔源抗体可变区(Vλ,Vk,and VH)和人源抗体恒定区(Ck and CH1)，以此来制造兔人嵌合Fab抗体库。Carlos F.Barbas III和Christoph Rader博士的研究充分证明这种方法是有效的。

另一种方法是利用酵母展示技术在酵母Pichia pastoris中表达特定的兔源Fab(或scFv)抗体。值得注意的是，小鼠以及人的k轻链都具有两个链内二硫键，而大多数兔源抗体除此之外还有另一个连接可变区和恒定区的二硫键。科学家在研究这条多出来的二硫键在兔/人嵌合Fab库的建造和筛选中的作用时发现，具有bas突变以及野生亲本b9这两个异型都是制备兔源单克隆抗体的绝佳来源。

噬菌体展示技术：

噬菌体展示技术是复制生物的某单一性状多样性和选择单一筛选压力进行相互作用，有目的的获得能够适应该筛选压力的性状的技术。具体到噬菌体抗体展示技术，通常是通过大肠杆菌丝状噬菌体M13的基因工程改造复制生物的抗体的遗传基因的多样性，并将基因编码的抗体和噬菌体的膜蛋白融合展示在噬菌体表面，选择是否能够和某个特定的靶点蛋白结合作为筛选压力，有目的的得到能够和该特定靶点蛋白结合的抗体及其遗传信息的技术。噬菌体抗体展示技术突破性贡献在于建立体外抗体功能和其对应的遗传信息的直接联系，筛选到有功能的抗体的噬菌体的同时也就得到了该噬菌体内蕴含编码抗体对应的遗传信息。

应用^[8]

兔单克隆抗体制备服务可用于抗体试纸条的开发和生产：

例如在磺胺类及氟喹诺酮类药物兔单克隆抗体的制备与多残留检测技术研究实验中将兔单克隆抗体技术用于检测磺胺和喹诺酮类多残留的可能性,合成了磺胺和喹诺酮类药物的人工抗原,通过抗原混和免疫,获得了免疫脾脏,运用杂交瘤技术分别制备了抗磺胺和抗氟喹诺酮药物残留的新型兔单克隆抗体SAs-80-8,FQs-111-2及FQs-31-3。而且还证实了通过重组抗体生产技术获得了抗磺胺类药物的重组抗体,但其检测的灵敏度要低于之前通过杂交瘤技术所获得的抗体。

参考文献

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[2]A new mouse myeloma cell line that has lost immunoglobulin expression but permits the construction of antibody secreting hybrid cell lines.Kearney JF,Radbruch A,Liesegang B,Rajewsky K.Journal of Immunology.1979

[3]Humanization of a mouse monoclonal antibody by CDR-grafting:the importance of framework residues on loop conformation.Kettleborough C,Saldanha J,Heath VJ,et al.Protein Engineering.1991

[4]A possible procedure for reducing the immunogenicity of antibody variable domains while preserving their ligand-binding properties.Eduardo A.Padlan.Molecular Immunology.1991

[5]Anatomy of the antibody molecule.Padlan E A.Molecular Immunology.1994

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[7]Rabbit monoclonal antibodies:generating a fusion partner to produce rabbit-rabbit hybridomas.H Spieker-Polet,S Periannan,Y Pi-Chen.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.1995

[8]刘娜. 磺胺类及氟喹诺酮类药物兔单克隆抗体的制备与多残留检测技术研究[D].浙江大学,2013.