大鼠单克隆抗体制备

背景^[1-5]

大鼠单克隆抗体制备是通过噬菌体抗体展示技术平台，能够在较短的周期内为客户生产拥有高特异性、高活性和高亲和力羊单克隆抗体。利用该技术平台，大鼠抗体基因被连接到噬粒载体上，再结合不同蛋白表达技术，如原核蛋白表达，真核蛋白表达，可以实现任何规模的大鼠单克隆抗体生产。客户可使用小分子、多肽、修饰多肽、蛋白、融合蛋白、修饰蛋白等作为抗原进行单克隆抗体制备。

同时，大鼠单克隆抗体制备也提供抗原制备服务，包括DNA合成、质粒构建、蛋白表达、蛋白纯化、蛋白修饰、多肽合成、多肽修饰、多肽与载体蛋白交联、小分子结构分析及与载体蛋白交联等。如客户需要，还提供抗体提纯及抗体鉴定服务。鼠单克隆抗体系使用大鼠进行免疫，并将其激活的B细胞与瘤细胞融合进而筛选阳性单克隆来制备的高特异性抗体，具有如下优点：

1.单克隆抗体的一般优点

2.检测小鼠来源的抗原一般不会产生背景交叉反应

3.解决针对小鼠蛋白的抗体难以在小鼠自身中产生的问题

服务具体内容：

1. 免疫动物：免疫大鼠3-5只；以及ELISA检测血清滴度。

2. 杂交瘤制备：细胞融合制备杂交瘤以及ELISA筛选细胞株。

3. 项目中样品反馈：将ELISA阳性细胞上清寄给客户检测并由客户检测并选择所需细胞株。

4. 亚克隆：

4.1.将客户选择的所有阳性细胞株亚克隆；

4.2.将亚克隆成功的阳性细胞株扩大培养，每个细胞株冻存两管备用；

4.3.抗体亚型鉴定；

5.抗体纯化：从细胞上清液用蛋白A或蛋白G纯化IgG抗体；或可选择在裸鼠或SCID小鼠中进行腹水培养并纯化。

影响大鼠单克隆抗体生产的因素：

1. 性别和年龄对动物腹水生长时间的影响

随着动物周龄的增大取腹水的时间呈上升的趋势并且雌性与雄性动物之间无显著差异。

2. 性别年龄对动物腹水产量的影响

雌性与雄性动物个体相比腹水产量随着年龄增加而增多

3. 其他因素对大鼠腹水生长时间及生产量的影响

除动物的年龄和性别因素外,细胞株的活力与特异性抗体的分泌能力对腹水的生长及腹水量也具有一定的影响,因此当一个细胞株的使用已连续1～5代后应改用新的细胞株。

应用^[6]

大鼠单克隆抗体制备可用于抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究：

例如在大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究的实验中用人免疫球蛋白IgG、IgM和辣根过氧物酶免疫LOU／C大鼠，并与大鼠IR983F细胞融合，获得数株抗人IgG、IgM和辣根过氧化物酶的单克隆抗体，融合率在70％以上，杂交瘤能在培养条件下长期生长并稳定地分泌抗体。

参考文献

[1]Construction and characterization of the chimeric monoclonal antibody E48 for therapy of head and neck cancer[J].Ruud H.Brakenhoff,Frank B.Gog,James E.Looney,Marijke Walsum,Gordon B.Snow,Guus A.M.S.Dongen.Cancer Immunology Immunotherapy.1995(3)

[2]Immune recognition,antigen design,and catalytic antibody production[J].Alfonso Tramontano.Applied Biochemistry and Biotechnology.1994(2)

[3]Mode of action of C-1027,a new macromolecular antitumor antibiotic with highly potent cytotoxicity,on human hepatoma BEL-7402 cells[J].Yong-jie Xu,Dian-dong Li,Yong-su Zhen.Cancer Chemotherapy and Pharmacology.1990(1)

[4]Rat hybridoma antibodies against canine parvovirus[J].G.Burtonboy,H.Bazin,N.Delferriere.Archives of Virology.1982(4)

[5]张晓娟,郭金薇,王艳蓉.影响大鼠单克隆抗体生产的因素[J].中国实验动物学杂志,1999(02):26-28.

[6]江敏.大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D].中国协和医科大学,1996.