10min病毒DNA/RNA提取试剂盒的使用说明
发布日期:2020/1/17 8:12:58
背景及概述[1]
RNA提取试剂盒，用于各种植物、动物、微生物的RNA提取，在每个试剂盒里都有一份说明使用说明书。实验者只需要按照说明书上的步骤操作即可。使用时无需配制其它试剂，非常方便，适合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、纯度高，可用于分子生物学后实验。10min病毒总核酸提取试剂盒适合于从血清、血浆、组织匀浆等样品中提取病毒总核酸。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀。该产品已经成功地提取了乙肝A/C、丙肝、以及诺如病毒标准品等的核酸。获得的DNA/RNA可直接用于PCR、RT-PCR、以及LAMP等系列下游实验。
组成
成份 装量
提取次数 48次
核酸吸附柱 48个
2ml 收集管 48个
Proteinase K 24mg
Protease Dissolve Buffer 2ml
Carrier RNA 250 μg
Buffer AL 20 ml
Buffer VHB 11 ml
Buffer RW2 20 ml
Nuclease Free Water 10 ml
注意[1]
1. Carrier RNA 固体使用前必须用 Nuclease Free Water 溶解至 1µg/µl，涡旋溶解。分装保存-70℃。如需长期保存于-20℃，请先按照使用次数分装后保存。
2. 溶解Proteinase K（20mg/ml）：加入Protease Dissolve Buffer溶解Proteinase K至终浓度为 20mg/ml。Proteinase K干粉在2-8℃保存一年，但溶解的 Proteinase K 须分装保存于-20℃。 反复冻融 Proteinase K 会影响其活性。
3. Buffer VHB 使用前必须用14 ml无水乙醇稀释，并于室温保存。
4. Buffer RW2 使用前必须用80 ml无水乙醇稀释，并于室温保存。
保质期
本产品除Proteinase K和Carrier RNA外，其它组份可在室温(15-25℃)保存12个月，长期保存时需置于2-8℃。Proteinase K 和 Carrier RNA 干粉室温运输，收到试产品后请保存于-20℃，溶解后分装保存于-20℃。
需要准备的材料和工具
Buffer PBS
无水乙醇
洁净的镊子和剪刀
微量移液器（100-1000μl，10-100μl）
无RNA酶的离心管和吸头
涡旋振荡器
离心机（转速≥10,000 rpm）
实验步骤[1]
转移20 µl Proteinase K 至1.5 ml离心管中。
转移200 µl样品，如血清、血浆、尿液、 培养液上清、或其它无细胞体液至装有 Proteinase K 的离心管中，振荡混匀5秒。若样品不足200 µl，用Buffer PBS或Nuclease Free Water 补足。（固体组织样品先用 Buffer PBS浸泡或匀浆后，离心取上清进行操作；干粉样品请先用Buffer PBS充分溶解后离心取上清进行操作。）
转移200 µl Buffer AL/Carrier RNA至样品中，涡旋混匀15秒。
使用前，按每1 ml Buffer AL加入15 µl Carrier RNA（1 µg/µl）。该混合液室温可保存2天。56ºC水浴10分钟。
加入250µl 无水乙醇至裂解液中，涡旋混匀 15 秒。室温静置 3 分钟。
把核酸吸附柱装在2ml 收集管中。转移混合液至柱子中。8,000 g离心 30-60秒。
倒弃滤液把柱子装回收集管中。加入500 µl Buffer VHB（已用无水乙醇稀释）至柱子中。8,000 g离心30-60秒。
使用前 Buffer VHB 必须按瓶子标签所示用无水乙醇稀释。
倒弃滤液把柱子装回收集管中。加入500 µl Buffer RW2（已用无水乙醇稀释）至柱子中。8,000 g 离心30-60秒。
使用前 Buffer RW2 必须按瓶子标签所示用无水乙醇稀释。
倒弃滤液把柱子装回收集管。加入500 µl Buffer RW2（已用无水乙醇稀释）至柱子中。8,000 g离心30-60秒。
倒弃滤液把柱子套回收集管。10,000 rpm 离心空柱3分钟甩干柱子。
将柱子转移至新的1.5ml离心管。加入15~30 µl Nuclease Free Water至柱子的膜中央。13,000 g离心1分钟。
弃去柱子，把DNA/RNA 保存于-80ºC。
主要参考文献
[1]CN201720132381.8一种RNA提取试剂盒
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