犬布鲁氏杆菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

犬布鲁氏杆菌PCR试剂盒是一种用于检测犬布鲁氏杆菌的生物试剂，它利用聚合酶链式反应（PCR）技术对样品进行体外扩增，以获得大量的拷贝数。通过使用特定的引物和探针，该试剂盒能够特异性地检测犬布鲁氏杆菌的DNA序列，从而确定样品中是否含有该细菌。

犬布鲁氏杆菌是一种革兰氏阴性需氧球杆菌，可引起犬布鲁氏杆菌病。近年来，该病在小动物临床病例数有所上升，但仍不如其他一些常见犬病多见。病犬的阴道分泌物和精液中菌浓度较高，这些正是犬感染该病的主要来源。然而，犬在布鲁氏杆菌传播过程中并不是很重要，因为该病主要通过牲畜之间传播。

使用犬布鲁氏杆菌PCR试剂盒可以快速准确地检测犬是否感染了布鲁氏杆菌。这对于及时诊断和治疗犬布鲁氏杆菌病非常重要，同时也可以减少误诊和漏诊的发生。

犬布鲁氏杆菌

犬布鲁氏杆菌病是由犬布鲁氏杆菌引起的,近年来在小动物临床上病例数又有所上升。布鲁氏杆菌是一种革兰氏阴性需氧球杆菌。尽管犬在食入牲畜胎盘和流产胎儿后容易感染布鲁氏杆菌,但是犬在该病的传播过程中不是很重要。病犬的阴道分泌物和精液中菌浓度和高,这些正是犬感染该病的主要传染源。主要表现为睾丸炎、附睾炎、淋巴结炎、关节炎、流产、不育等特征。因此对犬布鲁氏杆菌进行快速灵敏的诊断具有重要的意义。本产品就是为此目的根据PCR原理开发的产品，它具有下列特点：

1.即开即用，用户只需要提供细菌DNA模板。

2.引物经过精心优化，专一性强，只扩增犬布鲁氏杆菌。

3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5.本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次。

应用^[4-5]

犬布鲁氏杆菌PCR试剂盒可以用于白介素-2(IL-2)对布鲁氏菌侵染腹腔巨噬细胞（MΦ）的调节作用

分别用GFP/RFP的整合布鲁氏杆菌M5/16M(以下简称GFP-M5和RFP-16M)侵染腹腔巨噬细胞(MΦ),检测白介素-2(IL-2)调节作用下,被GFP-M5和RFP-16M侵染的MΦ培养不同时间所释放的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、NO因子的含量;CFU测定MΦ内GFP-M5和RFP-16M的活菌数,并计算MΦ的吞噬指数,判断MΦ的吞噬及其杀菌能力;利用血球计数板和倒置荧光显微镜,计算荧光细胞数,以此来计算MΦ的吞噬率;台盼蓝染色检测不同浓度和时间点被侵染后MΦ的存活率;观察在不同时间点和不同浓度IL-2作用下,被侵染后MΦ的增殖变化;利用RT-PCR和凝胶电泳技术验证MΦ不表达并分泌IL-2;以此来探讨IL-2对MΦ在被GFP-M5和RFP-16M侵染后的免疫调节的作用,为临床运用IL-2及治疗布病提供新的思路和理论依据。

方法:1、将正常的布鲁氏菌16M株与RFP-16M培养至对数期后收集菌体,用麦氏比浊管配置好所需菌液的浓度,依照细菌和细胞的比例为100:1进行侵染,利用平板计数法来比较正常细菌16M与RFP-16M在胞内的存活能力;

2、利用ELISA试剂盒,按照说明书操作,通过酶标仪分别检测不同浓度IL-2和不同时间点作用下,被侵染的MΦ释放的TNF-α、IFN-γ、NO因子的含量;

3、依据菌落形成单位(CFU)的方法,将不同浓度IL-2和各时间点作用下的被侵染细胞,用细胞裂解液裂解、PBS稀释,然后涂布于布鲁氏菌固体培养基,72h后进行菌落计数,计算各浓度、各时间点菌落数目和细胞的比例,得出MΦ吞噬指数;

4、在血球计数板和光学显微镜下,观察不同浓度IL-2和各时间点作用下的被侵染的MΦ的增殖变化;结合台盼蓝染色法,计算细胞死亡数,以此计算MΦ存活率;

5、使用血球计数板和激光共聚焦显微镜,根据GFP-M5和RFP-16M只在MΦ胞内表达荧光蛋白的特性,计数发光细胞数目和总细胞数目,从而计算MΦ吞噬率;

6、提取MΦ的RNA,利用RT-PCR试剂盒,反转录出模板cDNA,使用犬布鲁氏杆菌PCR试剂盒进行扩增,观察MΦ本身基因序列是否转录出表达IL-2的mRNA。

参考文献

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[2]Tetradecanol reduces EL-4 T cell growth by the down regulation of NF-κB mediated IL-2 secretion.Jung Up Park;;Bok Yun Kang;;Hwa-Jeong Lee;;Sunoh Kim;;Donghyuck Bae;;Jong-Hwan Park;;Young Ran Kim.European Journal of Pharmacology,2017

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[5]齐江姣.白介素-2(IL-2)对布鲁氏菌侵染腹腔巨噬细胞（MΦ）的调节作用[D].石河子大学,2018.