干酪酸的主要应用

背景及概述^[1]

干酪酸别名葡聚糖凝胶G-25，是一种由葡聚糖交联而制得的凝胶，具有立体多孔的网状结构。商品名为sephadex，是体积排阻色谱常用的固定相。其产品的交联度影响网状结构孔隙的大小。由于交联度常以吸水量表示，所以商品型号多用吸水量10倍数字表示。吸水量大、交联少。主要用于糖、多糖、氨基糖、肽类、蛋白质、酶的水溶液分离。也用于更高分子量及水不溶物质的分离。干酪酸是葡聚糖凝胶的一种。

应用 ^[2-7]

干酪酸主要用于糖、多糖、氨基糖、肽类、蛋白质、酶的水溶液分离。其应用举例如下：

1）制备一种双齿围沙蚕抗凝血肽，步骤包括：(1)样品预处理；(2)酶解；(3)超滤；(4)阴离子交换层析；(5)干酪酸(葡聚糖凝胶G-25)层析；(6)反相高效液相色谱分离纯化；最终获得双齿围沙蚕抗凝血肽。本发明安全性好，反应条件温和，过程控制容易，所得双齿围沙蚕抗凝血肽纯度高，抗凝血活性好，具有抗血栓作用，具有较好的医学应用价值。

2）用于一种重组人白介素11(rhIL-11)的精纯化。步骤包括如下：利用干酪酸(葡聚糖凝胶G-25)脱盐柱对融合蛋白进行脱盐后，收集脱盐液进行阴、阳离子交换层析柱串联上样，上样完毕后用特有的Gly-NaOH缓冲液洗脱，收集主要洗脱蛋白液，上干酪酸(葡聚糖凝胶G-25)脱盐柱脱盐，得到高纯度蛋白样品。本方法具有适合规模化生产、操作简便、生产周期短、产品纯度高、工艺稳定性强等特点。

3）用于制备一种营养补充组合物，其包括以下步骤：（1）取鸡血藤，党参，淮山药，天门冬，锁阳，肉桂，姜黄，泽泻和甘草；（2）向步骤1的中药中加入乙醇浸泡，回流提取，收集回流液；（3）将步骤2中的回流液经过干酪酸(葡聚糖凝胶G-25)柱分离，收集分子量大于1000的组分；（4）将步骤3的洗脱液经过阴阳离子交换床，并且将得到的清液冻干得到干粉。本发明的营养补充组合物搭配合理，营养全面，增重效果良好，并且其具有较好的肠胃适用性，具有较好的患者接受度。

4）用于制备小球藻多肽-壳聚糖纳米粒，首先采用低温超高压连续流细胞破碎机提取小球藻蛋白，木瓜蛋白酶水解小球藻蛋白,超滤离心管过滤,离子交换色谱DEAE-52和凝胶色谱干酪酸(葡聚糖凝胶G-25)柱分离纯化,再采用三聚磷酸钠离子交联法制备小球藻多肽-壳聚糖纳米粒子。本发明制得的小球藻多肽-壳聚糖纳米粒具有抗肿瘤活性,例如,对人肝癌细胞HepG2体外生长具有一定的抑制作用，当浓度为400μg/mL时,抑制率可达32%,有利于抗肿瘤保健食品和医药产品的开发利用。

5）用于蜂毒肽的分离提纯，是将粗蜂毒用水浸洗，滤液用乙醇沉淀，沉淀物用氢氧化铵和正丁醇萃取，萃取液以丙酮沉淀，使沉淀物溶于脲的醋酸盐缓冲液A中，在离子交换柱上作洗脱层析，柱下收集溶血活性最强吸收蜂V的层析馏份浓缩，浓缩液经葡聚糖凝胶G-10柱脱盐，丙酮沉淀，再溶解、脱盐沉淀处理，沉淀物溶于醋酸盐缓冲液B中，在干酪酸(葡聚糖凝胶G-25)柱上以缓冲B液作梯度洗脱，柱下收集吸收蜂II时层析馏份浓缩、脱盐冷冻干燥即得到电泳级蜂毒肽。本发明工艺减化后生产周期缩短1.5~2天，蜂毒肽收率比现有方法提高7~8%，提纯成本降低约30%，实现了蜂毒肽的工业化生产。

6）用于腹水型抗体的纯化，包括如下步骤：在4℃将小鼠腹水离心，取清液；在清液中加入磷酸盐缓冲液进行稀释，再搅拌加入饱和的硫酸铵溶液，直至饱和度达到45%~50%，静置析晶后，经离心，得到沉淀物；在沉淀物中加入磷酸盐缓冲液溶解，得到的溶液经过0.45微米滤膜，使用干酪酸(干酪酸(葡聚糖凝胶G-25))脱盐柱脱盐，使用磷酸盐缓冲液进行平衡和洗脱，收集蛋白溶液；将蛋白溶液上样至Protein-A/G亲和柱，再用磷酸盐缓冲液将杂蛋白从亲和柱上洗脱，然后用甘氨酸-盐酸溶液将抗体从亲和柱上洗脱，得到抗体溶液。上述腹水型抗体的纯化方法大幅度的提高了抗体的纯度，使得抗体的纯度大于90%。

主要参考资料

[1] CN201611066189.X一种双齿围沙蚕抗凝血肽的制备方法

[2]CN200610068871.2一种大肠杆菌表达的重组人白介素-11的纯化方法

[3] CN201711336046.0一种营养补充组合物及其制备方法

[4] CN201210318093.3小球藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法

[5] CN200710158989.9蜂毒肽的提纯方法

[6] CN201210572265.X腹水型抗体的纯化方法