放线菌属通用PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

放线菌属通用PCR试剂盒是即用型PCR试剂盒的改良产品，含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分，用户只需加入放线菌模板和放线菌引物即可进行PCR反应，具有广泛的用途。

放线菌(Actinomyces spp.)在自然界分布广泛，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中，尤其是含水量低、有机物丰富、呈中性或微碱性的土壤中数量最多。放线菌是一类极其重要的微生物资源。放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、和纤维素酶等）、维生素（B12）和有机酸等。此外，放线菌还可用于甾体转化、烃类发酵、石油脱蜡和污水处理等方面。少数放线菌也会对人类构成危害，引起人和动植物病害。因此，放线菌与人类关系密切，在医药工业上有重要意义，检测放线菌具有重要的意义。

放线菌属

放线菌属通用PCR试剂盒特点：

1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。

2.根据放线菌保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的放线菌。

3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.一管式闭管操作，降低了交叉污染。

5.本产品只能用于科研，足够50次20μL体系的荧光定量PCR

应用^[4-5]

放线菌属通用PCR试剂盒可以用于蚂蚁内共生放线菌的鉴定及抗菌活性产物研究

近年来科学家们在探寻新型抗生素的筛选途径时,发现昆虫内生菌能够产生许多种类多样的次生代谢产物,尤其那些能够帮助宿主抵御病原菌入侵的放线菌,其中一些具有新颖的结构并表现出较好的生物活性。由于这些化合物能够存在于真核宿主体内,且不危害宿主,所以它们很有可能对人类也没有毒副作用。因此这些昆虫内生放线菌具有很大产生人类药用的抗生素潜力,所以近年来昆虫内共生放线菌受到越来越多科学家的关注,昆虫内生放线菌也将是持续地发现新抗生素的重要领域之一,这对于对抗日益增多的抗药病原菌和新型疾病具有重要意义。

以实验室筛选得到的30株蚂蚁内生菌为材料,通过培养特征观察、抗菌活性测试和16S rRNA序列测序结果分析,发现两株潜在的放线菌新种3H-GS17T和2H-TWYE14T和一株具有良好抗菌活性放线菌1H-GS2,对它们分别进行了系统的分类学鉴定和活性物质的分离鉴定,结果如下:

(1)16S rRNA分析结果显示菌株3H-GS17T是珊瑚放线菌属的一株菌,与Actinocorallia glomerata JCM 9376T(98.13%)和Actinocorallia longicatena JCM 9377T(97.64%)的16S rRNA序列相似性最高。化学分类学特征也与Actinocorallia的特征一致。而DNA–DNA杂交结果和表型分析结果显示菌株3H-GS17T明显不同于与它相近的菌株,进一步的实验证明菌株3H-GS17T和珊瑚放线菌属的其他菌株都不相同。因此确定菌株3H-GS17T是珊瑚放线菌属的一个新种,命名为Actinocorallia lasicapitis,典型菌株是3H-GS17T(=DSM 100595T=CGMCC4.7282T)。

(2)16S rRNA分析结果显示2H-TWYE14T是链霉菌属的一株菌,与Streptomyces niveus NRRL 2466T(98.84%)的16S rRNA序列相似性最高。gyr B基因分析结果同样显示2H-TWYE14T属于链霉菌属。化学分类学特征也与链霉菌属的其他菌株相一致。而2H-TWYE14T与S.niveus NRRL 2466T之间的DNA–DNA杂交结果和表型分析结果显示2H-TWYE14T明显不同于S.niveus NRRL 2466T。因此确定菌株2H-TWYE14T是链霉菌菌属的一个新种,命名为Streptomyces camponoticapitis,典型菌株是2H-TWYE14T(=DSM 100523T=CGMCC 4.7275T)。

(3)活体生物活性检测显示菌株1H-GS2对部分测试真菌具有较好的生物活性,将菌株进行发酵,发酵产物同样显示良好的真菌抑制活性。对发酵产物中的化合物进行分离纯化后,利用现代光谱学进行结构分析鉴定,最终得到化合物白诺菌素(Albonoursin)。

参考文献

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[5]李垚.蚂蚁内共生放线菌的鉴定及抗菌活性产物研究[D].东北农业大学,2018.