鸡IgY单克隆抗体的制备服务

背景^[1-7]

鸡IgY单克隆抗体的制备服务基于噬菌体展示抗体库构建和筛选平台。制备服务可以提供从抗原设计、鸡的免疫、抗体基因的扩增、噬菌体展示抗体库的构建及文库筛选的一条龙服务。筛选到客户满意的抗体后，可以为客户提供抗体表达服务和抗体特异性、亲和力测定等服务。也可根据客户的需求，基于筛选到的抗体序列，将抗体表达成scFv、FAB或者IgY的形式。

鸡噬菌体展示抗体库的构建过程比鼠或者人抗体库构建要简单，克隆鸡抗体序列所需要的引物更少。这是因为鸡的免疫球蛋白多样性是通过基因重组产生的，这种基因重组是将功能VH、VL基因序列上游的假基因重组到功能基因，而不影响N-、C-末端序列而实现。可以为客户提供天然的或者免疫抗体库的构建服务。IgY天然抗体库的构建依赖于天然存在的V基因，因此得到的抗体库特异性非常广泛。

尽管天然抗体库被看成是普遍存在的抗体的来源，从中筛选到的特异性抗体亲和力已经能够满足要求。相反，免疫抗体库库容一般会小些，这是因为从免疫动物B细胞中扩增到的V基因已经在体内经过亲和力成熟，得到了机体的定向筛选。构建免疫库的缺点在于，必须要有目标抗体和免疫过程，而天然库不需要。我们还可以提供多种抗原同时免疫同一只动物以生产多特异性免疫抗体库的服务。

杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的免疫动物脾细胞（如小鼠B淋巴细胞）和具有永生功能的肿瘤细胞（如小鼠骨髓瘤细胞）。被特异性抗原免疫的免疫动物脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是它的抗体能够分泌产生结合抗原特定位置（表位）的抗体，但其自身不能在体外连续培养，具有永生功能的肿瘤细胞（骨髓瘤细胞）则可在培养条件下无限分裂、增殖，即具有所谓永生性。

在选择培养基的作用下，只有由一个B淋巴细胞与一个骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞才能具有持续培养的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。理论上，我们认为一个免疫后的B淋巴细胞只分泌产生一种抗体，而一个杂交瘤细胞只包含一个B淋巴细胞，所以增值后的杂交瘤细胞均来自一各克隆，因此产生的抗体就是单克隆抗体。

鸡的IgY抗体在一定程度上相当与哺乳动物的IgG抗体，与哺乳动物的IgG抗体相比，鸡IgY拥有更高的亲和力，更低的交叉反应性和更高的特异性，这些优点使IgY抗体在实验室的科学研究和诊断领域中更有应用价值。

IgY抗体的优点：

高亲和力：因为进化导致的物种差距，大部分哺乳动物蛋白对鸡的免疫原性比对其他哺乳动物更强，因此生产的抗体亲和力更高；所以鸡或其他鸟类是生产哺乳动物保守蛋白抗体的更好选择。

高特异性：与哺乳动物IgG相比，鸡IgY与哺乳动物蛋白的交叉反应要更低。

低背景：IgY和IgG在Fc结构上的差异导致IgY不与IgG的Fc受体结合，降低假阳性。

应用^[8]

鸡IgY单克隆抗体的制备服务可用于缩短鸡IgY抗体基因的扩增及表达实验的周期：

例如在鸡传染性支气管炎病毒IgY抗体基因的扩增及表达的研究中需要鸡IgY单克隆抗体的制备服务来缩短其研究周期，也可用于该实验的结果验证。该实验从免疫鸡IBV弱毒疫苗株的鸡脾脏中扩增出全长抗体基因,通过将其定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,构建了带有组氨酸标签的鸡IgY抗体基因重链和轻链表达质粒,并成功实现了在293T细胞中的表达。但需要对比传统单克隆抗体的制备才可以体现和验证新方法的优越性及稳定性。

参考文献

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