人源单克隆抗体制备服务

背景^[1-6]

人源单克隆抗体制备服务基于噬菌体展示技术的人源单克隆抗体研发平台构建的高质量的人源单克隆抗体抗体库可以为我们的客户所用，并为客户指定的靶点提供人源抗体的筛选服务。人源抗体，尤其是人源特异性抗体，是免疫治疗领域最重要和最有价值的研究对象之一。人源抗体基本对人没有免疫原性，无疑是癌症治疗和其他抗体药物研发中的选择。

此外，在伦理道德层面，免疫人来得到特异性的人源抗体的方式是绝对不会被接受的。幸运的是，随着对人类基因组的了解和生物工程的发展，使我们可以通过噬菌体展示技术避免这一问题。在过去的20多年，噬菌体展示技术已经成为应用最广的人源抗体生产技术。人源单克隆抗体制备服务可以为客户提供人源抗体库的筛选服务，客户可以选择提供特定的抗体库或者利用已建立的抗体库。

然不能通过免疫人的方式得到人源免疫抗体库，可以利用癌症或者其他感染性疾病患者志愿捐献的外周血淋巴细胞，或者利用接受过疫苗免疫的群体提供的外周血构建人的免疫抗体库。尽管抗原特异性B细胞在外周血中存在量非常少，这种方式仍然不失为一种获得特定已知抗原（如：炭疽毒素，SARS病毒）的人源抗体的好方法。

免疫抗体库中的抗体经过体内亲和力成熟过程，针对特定抗原的抗体数量会显著增加，因此获得高亲和力和特异性抗体的可能性也显著提高利用客户提供的含有抗原特异性B细胞的外周血样品，可以为客户提供人源噬菌体展示抗体库的构建及后续的筛选服务，为客户提供满意的高亲和力和特异性全抗体。

人源性单抗的制备主要依赖于两种技术平台，其一为基于转人抗体基因的转基因小鼠+杂交瘤技术，其二为噬菌体呈现抗体库技术。

不同噬菌体抗体库的构建策略：

1. 天然抗体库

天然抗体库是指利用正常人外周血中的B细胞作为抗体库基因的来源，制备的抗体库。此类抗体库是最早报道的能够成功应用于单抗制备的抗体库。此类抗体库的典型代表是上世纪九十年代初建立的Cambridge Antibody Technology Group Plc(CAT)。CAT抗体库的构建的基本策略如下：基于合成的全套抗体重链和轻链（包括kappa和Lambda）引物，利用PCR方法从43个健康人的外周血B细胞中扩增出人的轻链和重链可变区基因（Vl和Vh），然后再利用PCR将Vh和Vl构建成单链抗体(scFv)并克隆至噬菌粒，转化大肠杆菌获得抗体库。

2.全合成抗体库（fullysynthetic antibody library）

全合成抗体库是指用于构建抗体库的重链和轻链的可变区基因(Vh和Vl)都来源于体外合成，首先合成选定的具有代表性的抗体肧系基因作为模板，然后利用PCR的方法在CDRs区引入设计的突变，从而增加抗体库的多样性。

3.半合成抗体库(Semi-syntheticantibody library)

半合成抗体库是指在构建抗体库时，所使用的抗体基因有一部分是来源于合成的基因片段，而其它部分来源于天然的抗体基因。当前，有多个抗体技术公司报道了其各自的半合成抗体库，其抗体库的设计都各有特点。

4.混合库

混合库是指将分别构建的各类抗体库（包括天然抗体库，合成抗体库和半合成抗体库）中的2种或3种不同的类型的子库混合在一起构建而成的抗体库。混合库的优势是即保证抗体库的多样性（天然库及半合成抗体库的特点），又结合了全合成抗体库的人工设计和优化的理念，因而能够有效提高混合抗体库的实用性，理论上可以针对任何类型的抗原筛选到特异性抗体。

应用^[7][8]

疾病诊断：检测淋巴细胞表面分子、鉴定病原体、肿瘤诊断分型

疾病治疗：抗细胞表明分子单抗、抗细胞分子单抗、抗肿瘤单抗、抗血小板治疗

健康诊断：早早孕检测、女性排卵检测、乙肝表面抗原检测、吗啡毒品检测

最新研究成果：等位基因特异的抗-HLA单克隆抗体（ASHmAb）用于干细胞移植的组织相容性抗原分型的临床诊断

参考文献

[1]Characteristics of toxin-neutralization by anti-tetanus human monoclonal antibodies directed against the three functional domains[A],[B],and[C]of the tetanus toxin molecule and a reliable method for evaluating the protective effects of monoclonal antibodies[J].M.Matsuda,M.Kamei,N.Sugimoto,Y.Ma,S.Hashizume.European Journal of Epidemiology.1992(1)

[2]Establishment of stable mouse/human-human hybrid cell lines producing large amounts of anti-tetanus human monoclonal antibodies with high neutralizing activity[J].M.Kamei,S.Hashizume,N.Sugimoto,K.Ozutsumi,M.Matsuda.European Journal of Epidemiology.1990(4)

[3]Cachectin/tu-mor necrosis factor induces cachexia,anemia,and in-flammation.Tracey KJ,Wei H,Manogue KR et al.The Journal of Experimental Medicine.1988

[4]Auto-antibod-ies to tumor necrosis factor alpha in healthy humansand patients with inflammatory diseases and Gram-neg-ative bacterial infections.Fomsgaard A,Svenson M,Bendtzen K.Scandinavian Journal of Immunology.1989

[5]Antibodies toTNF-alpha:too little,too late.Kirschenbaum L,Astiz M,Rackow EC.Critical Care Medicine.1998

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[7]A human-ized anti-tumor necrosis factor-αmonoclonal antibodythat acts as a partial,competitive antagonist of the tem-plate antibody.Tempest PR,Barbanti E,Bremner P et al.Hybridoma.1998

[8]袁斌,何君,周育森,刘怀田,俞晓峰,王慧,黄策.从混合的噬菌体抗体库中直接筛选高亲和性的抗肿瘤坏死因子-α人源单克隆抗体[J].生物技术通讯,1999(04):258-262.