驼源单克隆抗体制备服务

背景^[1-6]

驼源单克隆抗体制备服务利用噬菌体抗体展示技术能够为客户在较短的时间内生产拥有高特异性、高活性和高亲和力单克隆抗体。采用噬菌体抗体展示技术制备单克隆抗体具有极大的优势，该技术不受物种来源的限制，同时利用该技术制备的杂交瘤以抗体基因的形式保存在噬粒载体上，结合实验不同蛋白表达，如原核蛋白表达，真核蛋白表达，可以实现任何规模的单克隆抗体生产并获得高特异性和高亲和力的重组单抗。

另外考虑到客户有可能会需要获得同时具备重链和轻链的驼源抗体，可以采用B细胞分选的方法，为客户提供驼源天然抗体的分离服务，补充噬菌体展示技术能够弥补的不足。同时，采用不同的筛选策略，如抗原递减法，同时结合蛋白重组表达平台，能够为客户提供高达~5g/L水平的重组抗体抗体表达发酵服务，极大提高了抗体批间一致性和稳定性。

客户也可以直接选择已经构建的天然羊驼噬菌体抗体展示文库进行目的抗体筛选服务，选择该服务，羊驼抗体只具有重链不含轻链，因此被称为重链抗体（heavy Chain Antibody,hcAb，羊驼抗体缺少轻链，由4个HC和2个VH组成，其中VH区域又被称为纳米抗体或单域抗体（single domain antibody,sdAb）。独立的羊驼VH区域具有完整的抗原结合能力，同时不像人工改造的单链抗体片段(single chain Fv,scFv)，容易聚集。和传统抗体相比，骆驼抗体具有极其稳定的性质，比如在60℃能保持活性，抵抗极端的pH环境。

与其他物种相比，骆驼是唯一一种可以生产正常的拥有重链和轻链的抗体，同时又能生产只拥有重链的抗体的哺乳动物。后者尽管只有两条重链，但是可以结合抗原，被称为重链抗体。这种亚型的抗体大约占骆驼成熟抗体的50%。重链抗体的Fc区与传统的抗体相似，包括CH2和CH3两个结构域，然而Fab区域缺少CH1区，只有VH区域，被称为VHH结构域。

此外，VHH的CDR3与传统抗体的CDR3相比更长，并且有时会有内部的二硫键存在其稳定结构的作用，这个更长的CDR3可能与抗体与酶或者受体裂缝处的抗原决定簇有关。这些特点使重链抗体拥有更广泛的抗原决定簇的结合功能，这一点对于药物研发十分重要。此外，VHH经过合适的修饰可以开发成单域抗体。

应用^[7][8]

驼源单克隆抗体制备服务可用于驼源天然单域重链抗体库的构建与鉴定。

方法：从未经主动免疫的健康羊驼(Lama pacos)外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录后作为轮PCR的模板。根据重链抗体保守区域设计引物,经巢式PCR法扩增获得了全套重链抗体可变区基因,将其克隆至噬菌粒pHEN1,电转化大肠杆菌TG1得到初级抗体库。通过ELSA等免疫学技术进行初步鉴定抗体库在通过抗体测序服务最终筛选出驼源单克隆抗体。

参考文献

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[8]Nanobody technology:A versatile toolkit for microscopic imaging,protein-protein interaction analysis,and protein function exploration.Beghein E,Gettemans J.Frontiers in Immunology.2017