重组人乳铁蛋白的应用

背景^[1-3]

重组人乳铁蛋白是一种生物活性蛋白，具有与铁离子结合的能力，可以抑制铁离子在肠道内的吸收，从而抑制肠道内细菌的生长，同时还可以促进免疫细胞的活性，增强免疫力。

重组人乳铁蛋白可以用于制作婴幼儿配方奶粉、孕妇奶粉、医用配方食品等，以及作为食品添加剂、营养补充剂等。由于其具有高活性和高纯度，重组人乳铁蛋白已成为婴幼儿配方奶粉中的重要添加成分。

此外，重组人乳铁蛋白还可以用于制作乳铁传递蛋白和乳铁结合蛋白，这些蛋白质具有良好的热稳定性和生物学活性，可广泛应用于食品、化妆品、医疗等领域。

重组人乳铁蛋白

乳铁蛋白（Lactoferrin，LF）也称为乳转铁蛋白，是一种铁结合蛋白，与铁离子的亲和力很高，是转铁蛋白的250～300倍。每个LF都能可逆的结合两个铁离子，将铁离子转运到细胞中，控制血液和分泌液中游离铁离子的浓度。

乳铁蛋白在初乳和牛奶中含量高，在眼泪、唾液、精液、鼻和支气管分泌物、胆汁和胃肠液等粘膜分泌物中的含量较低。此外，乳铁蛋白是先天防御系统的关键组成成分，其多种细菌、真菌、酵母、病毒和寄生虫表现出强大的抗菌活性，因此它还具有抗炎和抗癌活性，并具有多种酶功能。

乳铁蛋白在维持体内细胞铁水平中也起关键作用。因此LF作为抗氧化剂、免疫促进剂、补铁剂、药物载体等，被广泛用于化妆品、食品、动物生产、医疗等领域中。本品是由水稻细胞表达并通过蛋白提纯工艺而成。

重组人乳铁蛋白使用方法：

1.使用1×PBS/超纯水/生理盐水（9g/L NaCl），复溶至浓度为0.1-1 mg/mL。2-8℃或室温静置，30 min内可完全溶解。如需加快溶解，可上下轻轻颠倒离心管，直至冻干粉完全溶解。

2.将充分溶解的LF溶液，经0.22μm滤膜无菌过滤，分装后保存于2~8℃或-20℃。2~8℃，可稳定保存3-6个月；如需长期保存，建议置于-20℃。

应用^[4][5]

重组人乳铁蛋白可以用于重组人乳铁蛋白抗宫颈癌作用的研究

目前治疗宫颈癌大多采用化学合成药物,在治疗过程中易产生毒副作用和耐药性。蛋白类药物以其毒副作用低和不产生耐药性等优点已引起研究者的高度关注。基因治疗已成为癌症治疗领域中的研究热点。

人乳铁蛋白(human lactoferrin,hLTF)是一种隶属于铁结合蛋白家族的糖基化蛋白。它具有多种生理功能,如抑菌;抗病毒感染作用;调节体内铁的平衡;促进铁的传递和吸收;调节机体免疫功能;增强机体抗病能力等作用。

研究利用复制缺陷型腺病毒介导人乳铁蛋白基因,经过扩增,纯化之后通过体内外试验对Ad-hLTF抗宫颈癌活性及其作用机理进行了研究,获得如下结果:

(1) 重组人乳铁蛋白腺病毒(Ad-hLTF)和含绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-GFP)通过腺病毒纯化试剂盒纯化后病毒滴度分别达到1.6×1011pfu/ml和1.45×1011pfu/ml。

(2) 外源性乳铁蛋白基因经腺病毒载体成功转入Hela细胞,当感染复数MOI=100时,体外转染效率达到90%以上。

(3) western blot方法检出外源性乳铁蛋白的高表达,与Ad-GFP组和空白对照组相比差异显著有统计学意义(P<0.05)。

(4) Ad-hLTF能显著抑制Hela细胞生长,与分别时间和剂量呈正比。

(5) Ad-hLTF可诱导Hela细胞凋亡及细胞周期Gl期阻滞,与Ad-GFP组和空白对照组比较有显著差异性(P<0.05)。

(6) 体内试验结果显示Ad-hLTF组小鼠移植瘤生长速度远小于Ad-GFP组和空白对照组。

(7) 免疫组化结果显示,Ad-hLTF组可显著抑制p53表达,上调p19ARF的表达。

试验从体内体外两部分研究Ad-hLTF抗宫颈癌的作用,并从蛋白表达探讨了其诱导肿瘤凋亡的机理,为开发Ad-hLTF作为治疗宫颈癌的手段之一提供了理论依据。

参考文献

[1]Killing cancer cells by flipping the Bcl-2/Bax switch.Suzanne Cory;;Jerry M.Adams.Cancer Cell,2005

[2]HPV-mediated transformation of the anogenital tract.Renske D.M.Steenbergen;;Jillian de Wilde;;Saskia M.Wilting;;Antoinette A.T.P.Brink;;Peter J.F.Snijders;;Chris J.L.M.Meijer.Journal of Clinical Virology,2005

[3]Lactoferrin inhibits human papillomavirus binding and uptake in vitro..Antiviral Research,2004

[4]Bovine lactoferrin inhibits tumor‐induced angiogenesis.MarikoShimamura;YukioYamamoto;HiromiAshino;TsutomuOikawa;TadahikoHazato;HiroyukiTsuda;MasaakiIigo.Int.J.Cancer,2004

[5]吴国芳.重组人乳铁蛋白抗宫颈癌作用的研究[D].西北农林科技大学,2011.