小鼠结肠癌细胞的应用

背景^[1-3]

小鼠结肠癌细胞是一种常用于结肠癌研究的实验模型。这些细胞来源于小鼠的结肠癌组织，具有肿瘤细胞的特性，如快速增殖、侵袭和转移等。

小鼠结肠癌细胞可以用于研究结肠癌的发生、发展机制，以及探索新的治疗手段。通过研究这些细胞在体外和体内的行为，可以帮助科学家们更好地理解结肠癌的生物学特征，以及开发更有效的治疗策略。

此外，小鼠结肠癌细胞系也常被用于制作肿瘤模型，以模拟人类结肠癌的生长和转移。这些模型对于研究肿瘤的生物学、测试药物疗效以及研究肿瘤与宿主之间的相互作用都具有重要的意义。

小鼠结肠癌细胞

小鼠结肠癌细胞培养步骤：

一．小鼠结肠癌细胞培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸钠0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）小鼠结肠癌细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）小鼠结肠癌细胞冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．小鼠结肠癌细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）小鼠结肠癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）小鼠结肠癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

应用^[4][5]

小鼠结肠癌细胞可以用于胡桃醌对小鼠结肠癌CT-26体内抑制作用及机制研究

研究胡桃醌对结肠癌CT-26细胞在小鼠体内增殖、凋亡及转移的影响,以及胡桃醌促进CT-26肿瘤细胞凋亡和抑制其转移的相关可能作用机制。同时,探究了胡桃醌治疗结肠癌期间对荷瘤小鼠的机体免疫功能的影响。

选取健康的Balb/c小鼠皮下荷瘤,随机分为6组,分别为模型组(2%乙醇生理盐水溶液)、阳性对照组(20mg/kg 5-FU)、胡桃醌高剂量组(2.5mg/kg)、胡桃醌中剂量组(1.25mg/kg)、胡桃醌低剂量组(0.625mg/kg)、联合用药组(胡桃醌2.5mg/kg+5-FU20mg/kg),按体重每日腹腔注射给药一次,连续给药10天。末次给药结束24h后,称重记录并准备收集血液、胸腺、脾脏、肿瘤组织样本。血液静置离心分离得血清,应用Elisa方法检测ICAM-1、VEGF、GSH、IL-8在小鼠血清中的含量;胸腺和脾脏称重计算胸腺指数与脾脏指数;肿瘤组织测量长径与短径计算瘤体积,称重记录瘤重;将肿瘤组织切割为两部分,一部分置于生理盐水用于流式细胞术检测肿瘤细胞周期及凋亡,另一部分固定于4%甲醛溶液,用于HE染色病理观察以及免疫组化检测肿瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3、MMP-2、MMP-9、β-链蛋白的表达水平。

实验结果表明,胡桃醌高剂量2.5mg/kg和中剂量1.25mg/kg均可有效抑制结肠癌CT-26细胞在小鼠体内的生长,抑瘤率分别为46.2%和42.4%;胡桃醌与5-FU联合应用抑瘤率为74.8%,比胡桃醌与5-FU单独应用的抑瘤效果好;5-FU治疗肿瘤时,小鼠的胸腺指数、脾脏指数、体重与模型组相比均显著性下降,而胡桃醌治疗后,小鼠的胸腺指数、脾脏指数、体重均无显著性下降,胡桃醌可使CT-26肿瘤细胞阻滞于G2/M期,并下调肿瘤细胞中Bcl-2蛋白、β-链蛋白、MMP-2蛋白、MMP-9蛋白表达,上调Bax与Caspase-3蛋白表达;胡桃醌高剂量2.5mg/kg可显著降低荷瘤小鼠血清中ICAM-1、VEGF和GSH的含量。

根据结果可知胡桃醌在抗肿瘤过程中,与5-FU相比可维持机体的体重和免疫功能;胡桃醌的抗肿瘤作用机制可能是阻滞CT-26肿瘤细胞周期于G2/M期影响其增殖,介导线粒体依赖的Caspase-3凋亡途径促进肿瘤细胞凋亡,下调血管生成因子、β-链蛋白、MMP-2蛋白、MMP-9蛋白的表达抑制肿瘤细胞浸润与转移。本研究为胡桃醌成为可能的抗结肠癌药物提供新的理论和实验依据。

参考文献

[1]Dendritic Cells as Pharmacological Tools for Cancer Immunotherapy..Anguille Sébastien;;Smits Evelien L;;Bryant Christian;;Van Acker Heleen H;;Goossens Herman;;Lion Eva;;Fromm Phillip D;;Hart Derek N;;Van Tendeloo Viggo F;;Berneman Zwi N.Pharmacological reviews,2015

[2]Pooled Analysis of Long-Term Survival Data From Phase II and Phase III Trials of Ipilimumab in Unresectable or Metastatic Melanoma..Schadendorf Dirk;;Hodi F Stephen;;Robert Caroline;;Weber Jeffrey S;;Margolin Kim;;Hamid Omid;;Patt Debra;;Chen Tai-Tsang;;Berman David M;;Wolchok Jedd D.Journal of clinical oncology:official journal of the American Society of Clinical Oncology,2015

[3]Ex vivo culture of circulating breast tumor cells for individualized testing of drug susceptibility.Min Yu;Aditya Bardia;Nicola Aceto;Francesca Bersani;Marissa W.Madden;Maria C.Donaldson;Rushil Desai;Huili Zhu;Valentine Comaills;Zongli Zheng;Ben S.Wittner;Petar Stojanov;Elena Brachtel;Dennis Sgroi;Ravi Kapur;Toshihiro Shioda;David T.Ting;Sridhar Ramaswamy;Gad Getz;A.John Iafrate;Cyril Benes;Mehmet Toner;Shyamala Maheswaran;Daniel A.Haber.Science,2014

[4]Activation of Gpr109a,Receptor for Niacin and the Commensal Metabolite Butyrate,Suppresses Colonic Inflammation and Carcinogenesis.Nagendra Singh;;Ashish Gurav;;Sathish Sivaprakasam;;Evan Brady;;Ravi Padia;;Huidong Shi;;Muthusamy Thangaraju;;Puttur D.Prasad;;Santhakumar Manicassamy;;David H.Munn;;Jeffrey R.Lee;;Stefan Offermanns;;Vadivel Ganapathy.Immunity,2014

[5]刘天宇.胡桃醌对小鼠结肠癌CT-26体内抑制作用及机制研究[D].北京理工大学,2021.