蛋白保护剂AEP-HBC的应用

背景^[1-3]

蛋白保护剂AEP-HBC是一种酶保护剂，具有抗沉淀、增溶、促效等作用，适合酶及蛋白液体体系。它的纯度大于99.0%，建议使用量为0.8%～3.5%。蛋白保护剂AEP-HBC可以用于蛋白质的稳定化处理，提高蛋白质的稳定性和耐储存性。蛋白保护剂AEP-HBC可用于从生物体中分离、提纯或化学合成，或通过发酵方法制备。蛋白保护剂AEP-HBC也被用于PCR检测试剂盒的制造，如PCR试剂盒、核酸检测试剂盒和荧光定量检测试剂。此外，蛋白保护剂AEP-HBC也可用作离子选择电极的模块组合参与自动化分析，以及免疫化学分析中的自动化检测技术，如apoA I、apoB等载脂蛋白的测定，脂蛋白(a)测定、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)质量测定等等。

蛋白保护剂AEP-HBC

蛋白保护剂AEP-HBC的原理是通过特定的化学反应，将有害的氧化剂转化成无害的化合物，从而保护蛋白质不受氧化损伤。具体来说，AEP-HBC可以与过氧化氢等氧化剂反应，将其转化为水和氧气，从而避免了对蛋白质的氧化损伤。此外，AEP-HBC还可以抑制蛋白质的聚集和沉淀，从而保护其结构和功能。

蛋白保护剂AEP-HBC的主要成分是未知的，因为这种化学品的详细成分通常不会公开。然而，根据其常见的用途和特性，可以推测其可能包含某些特定的化学物质。

蛋白保护剂AEP-HBC是一种蛋白保护剂，用于防止蛋白质受到氧化损伤或聚集。因此，可以合理推测AEP-HBC可能包含抗氧化剂或抗聚集剂等成分。

应用^[4-5]

蛋白保护剂AEP-HBC可以用于微生物谷氨酰胺转胺酶分离提取及稳定性研究

利用微生物发酵生产TG酶,同时研究了蛋白部分水解物对TG酶的稳定作用。国内生产的TG酶,酶活收率低,只接近味之素公司产品的1/10。本研究旨在提高酶液分离处理时的收率,以及生产和贮存过程中的稳定性,为TG酶的广泛使用提供基础。

提高TG酶分离的收率和酶液在贮存过程中的稳定性进行了研究,并讨论了TG酶热稳定性的机理。(1)使用Grossowicz比色法测定分离提取过程中每步获得的TG酶活力;同时利用Folin酚法测定酶液的蛋白质浓度。通过计算酶活收率和酶的比活力,对超滤和乙醇沉淀步骤进行了研究。

(2) 通过计算不同保护剂复合的酶在高温热处理后酶活残留率的方法,比较几种保护剂对TG酶稳定性的作用。

(3) 利用热重(TG)/差式扫描量热(DSC)技术,分析当保护剂存在时TG酶的热力学数值的变化,包括变性温度(Tm)、热焓(AH)和热失重。

通过本研究获得的结果:(1)TG酶分离提取过程中几个关键步骤的最适条件:发酵液下罐后,经8层纱布过滤除去菌体,选用截留分子量10000的超滤膜超滤,超滤浓缩倍数2.5至3倍之间时效率最高。将超滤后的酶液pH值调节到7.5至8,加入体积为酶液体积1.5倍的冷乙醇沉淀,酶活收率达到85%左右。

(2) 保护剂对TG酶稳定性的保护作用比较:加入海藻糖,酶活残留率提高35%;蔗糖加入后,酶活残留率提高30%;加入葡萄糖后,酶活残留率提高25%左右。加入脱脂乳,酶活残留率提高50%;加入乳清粉后酶活残留率提高近40%。

(3) 利用TG/DSC分析热稳定作用的机理:纯酶的Tm值为123℃,加入保护剂后,Tm值最高可以达到155℃;纯酶的AH为17.9 J/g,加入保护剂后AH最高达到58.4 J/g;纯酶失重率为35%,加入保护剂后,失重率最低为28%。

结论:(1)TG酶在分离提取时获得的酶活收率和酶的比活力大小与处理过程中的关键步操作条件密切相关。超滤的浓缩倍数决定了超滤时间、超滤后酶液的酶活和蛋白质浓度。乙醇沉淀前pH值和乙醇加入量对产品的收率和外观有直接影响。

(2)使用有机溶剂沉淀TG酶时,乙醇比丙酮更适合作为沉淀剂,因为乙醇无毒、易获得。

综上所属蛋白保护剂AEP-HBC可以用于微生物谷氨酰胺转胺酶分离提取及稳定性研究中TG酶稳定性的保护。

参考文献

[1]A Central Composite Design to Investigate the Thermal Stabilization of Lysozyme..Pharmaceutical Research,1999

[2]The Use of Modulated Temperature DSC for the Study of Pharmaceutical Systems:Potential Uses and Limitations.Duncan Q.M.Craig;;Paul G.Royall.Pharmaceutical Research,1998

[3]Characterization of a Solid State Reaction Product from a Lyophilized Formulation of a Cyclic Heptapeptide.A Novel Example of an Excipient-Induced Oxidation.David C.Dubost;;Michael J.Kaufman;;Jeffrey A.Zimmerman;;Michael J.Bogusky;;Arthur B.Coddington;;Steven M.Pitzenberger.Pharmaceutical Research,1996

[4]Microbial transglutaminase—a review of its production and application in food processing.Y.Zhu;;A.Rinzema;;J.Tramper;;J.Bol.Applied Microbiology and Biotechnology,1995

[5]柏俊华.微生物谷氨酰胺转胺酶分离提取及稳定性研究[D].华东师范大学,2005.