兔抗体测序服务

背景^[1-6]

兔抗体测序服务是用鸟枪法与抗体序列数据库相结合“Database Assisted Shotgun Sequencing”（DASS）的技术，提供卓越的兔抗体测序服务。兔抗体对于多克隆抗体与单克隆抗体而言，是一个同时具有高特异性和亲和性的抗体。兔多抗已经被应用于进行诊断治疗。而由于可以对兔单抗进行无限量的生产供应，其应用在近几年也引起了极大的兴趣。

人和小鼠都有五种类型(IgA,IgD,IgE,IgG,and IgM)的抗体。目前为止，只在兔中发现其中的四种(IgA,IgE,IgG,and IgM)。一般研究用的抗体主要是IgG类型，但兔只有一种IgG亚型。因为兔子与大部分研究用模式生物有较大的种间距，在过去的十几年里，人们一直在努力制备兔单克隆抗体。对于在啮齿动物中没有免疫原性的抗原来说，这种方法尤其重要。与小鼠单抗相比，兔单抗具有相似的特异性，且具有较高的灵敏度，这允许兔单抗有较高的稀释比（平均5到10倍）；此外，一些情况下,为了达到更好的染色效果，也不需要抗原修复操作。

DASS（Database Assisted Shotgun Sequencing)技术，通过使用最先进的质谱仪和强大的数据处理算法，生成大量序列信息，进而运用最新计算程序对MS/MS光谱从头测序，利用其独特的内部数据挖掘工具保证我们从上万条MS/MS光谱数据中提取目标抗体序列信息。在传统测序中，往往只能检测蛋白消化后的部分肽段序列，再用这些肽段序列与已知的蛋白数据库进行比对，根据一定算法打分，推算出可能性高的蛋白和序列。蛋白质从头测序这项技术是根据肽段与惰性气体相碰撞产生的一系列的有规律的片段离子之间的质量差来推断氨基酸序列。

我们可以根据肽键断裂处的y离子和b离子来推测氨基酸序列，以及翻译后修饰。De novo sequencing有一项突出的优势，是传统质谱测序不能达到的，那就是不依赖任何蛋白质数据库，对未知蛋白质从头测序。蛋白质分子的序列是蛋白质发挥功能的基础。准确测定蛋白质序列在在研究蛋白功能表位，检测商业单克隆抗体，疫苗，以及试剂盒等药物方面有着很重要的作用。虽然目前已有很多对蛋白测序的研究，但是目前对蛋白质精准测序还是不能够像DNA一样快速精准。

应用^[7][8]

兔抗体测序服务可用于兔单克隆抗体筛选鉴定：用兔抗体测序服务对兔单克隆抗体筛选鉴定，以牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)为载体蛋白,合成了β-肾上腺素受体激动剂莱克多巴胺的人工抗原。选用WHB黑眼大白兔为免疫动物,将免疫的兔脾细胞和240E骨髓瘤细胞杂交,获得了4株稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株。在免疫的兔脾细胞和240E骨髓瘤细胞杂交后需要用兔抗体测序服务对单个杂交细胞进行兔抗莱克多巴胺抗体鉴定从而筛选出只分泌抗莱克多巴胺抗体的杂交细胞。

参考文献

[1]Identification of turkeybiliary metabolites of ractopamine hydrochloride and themetabolism and distribution of synthetic[14C]ractopamineglucuronides in the turkey(J).Smith D J,Feil V J and Paulson G D..2000

[2]Effects of ractopamine at dif-ferent dietary protein levels on growth performance and car-cass characteristics in finishing pigs(J).Xiao R J,Xu Z R and Chen H L.Animal Feed Scienceand Technology.1999

[3]Effects of ractopamine HCl stereoisomers on growth,nitrogen retention,and carcass composition in rats(J).Ricke E A,Smith D J,Feil V J,Larsen G L and Caton J S.The Journal of Animal Ecology.1999

[4]Growth characteristics of rats re-ceiving ractopamine hydrochloride and the metabolic disposi-tion of ractopamine hydrochloride after oral or intraperitonealadministration(J).Smith D J and Paulson G D.The Journal of Animal Ecology.1994

[5]Capillary electrophoretic separation andquantitation of ractopamine stereoisomers using cyclodextrinsas chiral additives(J).Inout T and Chang J P.Journal of Liquid Chromatography andRelated Technologies.2003

[6]New animal drugs for use in animal feeds:Ractopaminehydrochloride(J).FDA.Federal Register.2000

[7]Development of an immunoassayfor theβ-adrenergic agonist ractopamine(J).Shelver W L and Smith D J.Journal ofImmunoassay.2000

[8]张建群,杨扬,王艺熹,张铭,裘霁,郑晓冬.β-肾上腺素受体激动剂莱克多巴胺兔单克隆抗体的制备[J].农业生物技术学报,2007(03):398-403.