红细胞稀释液(计数液)的应用

背景^[1-3]

红细胞稀释液(计数液)用于红细胞计数由柠檬酸钠，甲醛等组成。红细胞在常规化验英文常缩写成RBC，是血液中数量最多的一种血细胞，也是大多数动物体内通过血液运送氧气的媒介，同时还具有免疫功能。红细胞稀释液(Erythrocyte dilution)作用原理是等渗稀释液将血液按一定倍数稀释，充入计数池后显微镜下计数一定体积内红细胞数，换算求出每升血液中红细胞的数量。

红细胞稀释液(计数液)

红细胞稀释液(计数液)使用方法：

1.取中号试管，加Erythrocyte dilution 2 ml。

2.用洁净干燥微量吸管取末梢血或抗凝血10 ul，擦去管外余血后加至Erythrocyte dilution底部，再轻吸上层清液清洗吸管2~3次，立即混匀。

3.用干净微量吸管将红细胞悬液充入细胞计数板的细胞池，注意不要产生气泡或外溢，室温放置1～3min。

4.置于显微镜高倍镜下依次计数中央大方格内四角和正中共5个中方格内的红细胞。压线细胞按”数上不数下，数左不数右”的原则进行计数。

注意事项：

1.采血时不能过于挤压，针刺深度应适当。

2.不应以血红蛋白浓度来折算红细胞数。

3.在参考范围内，两次红细胞计数相差不应超过5%。

4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用^[4][5]

红细胞稀释液(计数液)可以用于日粮中共轭亚油酸对小鼠红细胞数量影响的研究

共轭亚油酸(CLA)是一种常用的食品添加剂,但是动物试验表明日粮中添加CLA会造成明显的代谢障碍,如脂肪肝、高血糖等。同时CLA是一种不饱和脂肪酸,可对红细胞膜脂质双层造成一定的影响。已有研究表明,给老年大鼠饲喂添加CLA的饲料可使红细胞膜总n-6不饱和脂肪酸含量显著降低,n-6/n-3比值会下降,而这种变化可能对红细胞膜流动性、渗透脆性及溶血速率产生不良影响。但是,饲喂添加CLA的饲料对红细胞数量的影响尚未见报道。CLA可导致小鼠代谢障碍,这在本实验室先前的研究中已有报道。

在CLA导致小鼠代谢障碍的情况下,对红细胞数量的改变及其可能的原因进行了研究。首先,给39日龄昆明白雄性小鼠饲喂含1.5%共轭亚油酸的饲料(CLA组,n=8),以1.5%的亚油酸为对照组(LA组,n=8),CLA组小鼠表现出脂肪肝和脂肪组织减少为特征的代谢障碍。然后,检测两组小鼠RBC(红细胞计数)、HGB(血红蛋白浓度)、HCT(红细胞压积)、MCV(平均红细胞体积),结果显示,与LA组相比,CLA组小鼠RBC减少了48.96%,HCT减少了46.49%,MCV升高了7.82%,差异均显著(P<0.01),CLA组小鼠HGB有降低的趋势(差异不显著)。连续检测发现,在饲喂的第47,61,86天,红细胞数量较LA组减少,差异显著(P<0.05)。CLA组小鼠的血液网织红细胞数量是LA组的两倍多(P<0.01)。

此结果提示CLA组小鼠骨髓造血功能代偿性增强。本论文又对日粮中CLA降低小鼠红细胞数量的机制进行了探讨。首先,检测了红细胞膜的渗透脆性,结果发现CLA组小鼠与LA组小鼠之间并无显著变化(P>0.05)。

随后,Q-PCR法检测小鼠肾脏EPO基因表达量以及亚铁嗪比色法检测血清铁含量,发现CLA组小鼠与LA组间并无显著差异,但是ELASA试剂盒检测VB12、叶酸含量发现,CLA组小鼠的血浆VB12含量较LA组小鼠减少了24.72%(P<0.05),血浆中叶酸含量则减少了23.15%(P<0.01)。

并且,血常规检测结果显示,与LA组相比,CLA组小鼠的单核细胞比例(MONO%)升高了41.77倍(P<0.05)。上述结果提示,CLA组小鼠红细胞数量减少的原因可能是红细胞合成原料(VB12和叶酸)不足,或单核细胞吞噬红细胞的作用加强,或者两者都是。

结论:日粮中CLA使小鼠红细胞数量减少;血浆中VB12和叶酸含量降低以及MONO%升高可能是红细胞数量减少的原因;CLA组网织红细胞数量增多代表了骨髓造血代偿性增强。

参考文献

[1]Glutathione Prevents Free Fatty Acids‐Induced Oxidative Stress and Apoptosis in Human Brain Vascular Endothelial Cells Through A kt Pathway.Hou‐Guang Zhou;;Ling Liu;;Yu Zhang;;Yan‐Yan Huang;;Ying‐Hong Tao;;Shuo Zhang;;Jing‐Jing Su;;Yu‐Ping Tang;;Zhuang‐Li Guo;;Ren‐Ming Hu;;Qiang Dong.CNS Neurosci Ther,2013

[2]Methylglyoxal promotes oxidative stress and endothelial dysfunction..Pharmacological Research,2012

[3]Hepcidin Destabilizes Atherosclerotic Plaque Via Overactivating Macrophages After Erythrophagocytosis.Jing Jing Li;;Xiao Meng;;Hai Peng Si;;Cheng Zhang;;Hui Xia Lv;;Yu Xia Zhao;;Jian Min Yang;;Mei Dong;;Kai Zhang;;Su Xia Liu;;Xue Qiang Zhao;;Fei Gao;;Xiao Ling Liu;;Tai Xing Cui;;Yun Zhang.Arteriosclerosis,Thrombosis,and Vascular Biology,2012

[4]Correlations among Anaplasma marginale parasitemia and markers of oxidative stress in crossbred calves.Ujjwal Kumar De;;Sahadeb Dey;;Partha Sarathi Banerjee;;Monalisa Sahoo.Tropical Animal Health and Production,2012

[5]付怡静.日粮中共轭亚油酸对小鼠红细胞数量影响的研究[D].河南农业大学,2016.