MONO-MAC-6 人急性单核细胞白血病细胞系的应用

背景^[1-3]

MONO-MAC-6人急性单核细胞白血病细胞系是从一名患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血中分离得到的，自1980年建系以来，MONO-MAC-6人急性单核细胞白血病细胞系细胞被广泛用于单核细胞和巨噬细胞相关的机制、信号通路以及营养和药物运输等研究中。

MONO-MAC-6人急性单核细胞白血病细胞系

MONO-MAC-6人急性单核细胞白血病细胞系细胞培养方法：

1）复苏MONO-MAC-6人急性单核细胞白血病细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）MONO-MAC-6人急性单核细胞白血病细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）MONO-MAC-6人急性单核细胞白血病细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；

1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

MONO-MAC-6人急性单核细胞白血病细胞系可以用于高血脂致大鼠心肌微血管损伤和心肌缺血性改变及与备解素关系的研究

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)也是一个炎症性疾病,是单核/巨噬细胞、补体和T-淋巴细胞的活化作用诱导慢性炎症进展的结果。补体系统是机体体液防御机制的一个组成部分,也是一个炎症过程的初级调节介质,近十年来已有较多的新证据表明,补体活化作用在AS损伤的起始阶段和进展阶段均起着重要作用。补体系统通过经典途经、植物凝集素途经或旁路途经激活,其中旁路途经是通过微生物表面和6个血浆糖蛋白之间的相互作用激活,备解素(Properdin,P因子)是旁路途经的正性调节剂,它作为环聚合物(如二聚体、三聚体、四聚体等)循环在血清中,通过结合在C3和C5转化酶复合物(C3bBb和C3bnBb)上而加强其稳定性。

尽管备解素在血浆中的浓度范围达到4～6μg/ml,但其生理学来源还不清楚。单核细胞、T-淋巴细胞和骨髓源性细胞系(如HL-60,U-937,Mono Mac 6等)可以合成备解素,但不可能产生显著的血浆水平,这是因为单核细胞产生备解素有赖于血液中有限的数量,而中性粒细胞(PMN)由于释放备解素后会发生细胞脱颗粒现象,故推测备解素的生成更趋向于在血管、而非单独在血液循环中。血管内皮细胞(Endothelial cell,EC)可表达大量补体系统相关蛋白,然而研究发现,虽然备解素属于补体成分,但维持在标准培养条件下的EC中不能检测到备解素。

最近,已有报道剪切力作用下的EC具有合成备解素的能力,而备解素与心肌微血管改变之间的关系国内外尚无报道,了解备解素的表达与心肌微血管病变之间的关系,可能对于进一步探究补体的激活和补体。

参考文献

[1]Contact-dependent inhibition of angiogenesis by cardiac fibroblasts in three-dimensional fibrin gels in vitro:implications for microvascular network remodeling and coronary collateral formation.V.Nehls;;Rita Herrmann;;Mirja Hühnken;;Alois Palmetshofer.Cell&Tissue Research,1998

[2]Expression of the components and regulatory proteins of the alternative complement pathway and the membrane attack complex in normal and diseased synovium.D.Guc;;P.Gulati;;C.Lemercier;;D.Lappin;;G.D.Birnie;;K.Whaley.Rheumatology International,1993

[3]Properdin:Approaching four decades of research.Karen K.Maves;;John M.Weiler.Immunologic Research,1993

[4]Pancreatic enzyme requirements for the dissociation of rat hearts for culture.David W.Speicher;;Richard L.McCarl.In Vitro,1974

[5]滕丽新.高血脂致大鼠心肌微血管损伤和心肌缺血性改变及与备解素关系的研究[D].第三军医大学,2005.