车叶草苷的主要应用

背景及概述^[1][2]

长尾粗叶木(Lasianthusacuminatissimus)为茜草科粗叶木属植物，其根俗称“铁铁骨人参”，具有行气活血、祛湿强筋、止痛的功效，主要用于治疗跌打损伤、风湿关节痛、腰肌劳损等症。长尾粗木叶中康类风湿性关节炎的有效成分是车叶草苷等环烯醚萜类成分。

车叶草苷，针状结晶(丙酮)，溶于水、甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、二氧杂环己烷、吡啶、醋酸，几乎不溶于乙醚、苯、氯仿等。车叶草苷（Asperuloside）为环烯醚萜类化合物, 具有抗菌、抗氧化、抗诱变、抗肿瘤、消炎镇痛等广泛的药理作用。

车叶草苷

应用^[3]

1.制备防治神经退行性疾病药物

采用TRAP实验评价车叶草苷对HEK293T细胞端粒酶活性的影响：HEK293T细胞接种于12孔板中，置于37℃，5%CO2孵箱培养48h，分别加入车叶草苷，其终浓度分别为0.01，0.1，1.0，10μM，空白组为0.1%DMSO，复孔。继续孵育48h后收集细胞。离心除去培养液，加入PBS洗涤，Chaps消化，离心，取上清液，参照TRAPEZE®端粒酶试剂盒操作说明，测定车叶草苷对端粒酶的活性。

结果：车叶草苷对端粒酶具有明显的激活作用，在0.01，0.1，1.0，10μM浓度下，端粒酶活性分别增加149.6%，156.9%，156.9%和220.4%。结果表明车叶草苷具有基于端粒酶机制的促神经细胞再生的潜力。

2.车叶草苷制备治疗肾纤维化药物

取10kg白花蛇舌草加入10倍量体积浓度为75％乙醇回流提取2次，每次1h，60℃减压浓缩至相对密度为1.10-1.20；往浓缩液中加入重量百分比为0.5％的活性炭脱色，高速离心，取上清，真空干燥，得白花蛇舌草粗提物；将粗提物采用30％甲醇溶解，以ODS开口柱为固定相，30％甲醇水溶液洗脱，回收甲醇后，真空干燥。干燥后样品采用5％甲醇溶解，采用高速逆流色谱法分离获得车叶草苷酸。制备条件：YMC-PackODS-A色谱柱(20×250mm，5μm)为色谱柱，以体积浓度为5％的甲醇为流动相，等梯度洗脱60min；检测波长235nm；进样体积100μL。

采用湿法制粒的工艺，称量实施例1制备的车叶草苷粉末10mg，一水乳糖50-100g和微晶纤维素25-50mg，内加羧甲基纤维素钠1.2mg，过60目筛，混合，再次过筛分散，混合，配制6％的羟丙甲纤维素E5溶液，加入6％的羟丙甲纤维素E5溶液制粒，过20目筛，置于烘箱60℃干燥3h，再加入羧甲基纤维素钠1.2mg，胶体二氧化硅1.2mg和硬脂酸镁1-3mg，混合，使用6.5mm直径的浅弧圆形冲压片，即得。

制备^[2]

方法一：

取1kg长尾粗叶木的根或茎，粉碎，加入4倍量55％的乙醇超声提取2次，每次1h，提取频率为35KHz，过滤得到提取液，提取液加入0.3％针剂类医用活性炭，50℃保温脱色30min，脱色液浓缩至无醇味，通过AB-8型大孔树脂柱富集，先用水洗脱杂质，再用3BV30％的乙醇溶液洗脱，收集富含车叶草苷的洗脱液，浓缩干燥，干燥物采用高速逆流色谱法分离，以乙酸乙酯-正丁醇-水(2∶2∶5)为两相溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，先后泵入固定相和流动相，设定流动相流速为3ml/min，同时启动主机，调节转速为850rpm，待管柱内溶剂系统达成动态平衡，进样，收集高浓度车叶草苷流分，浓缩干燥即得车叶草苷0.9g，含量为98.5％。

方法二：

取杜仲叶100公斤，粗碎后分别以600L和400L去离子水在55摄氏度动态提取两次，每次提取时间为2小时；合并提取液，加2N盐酸调节PH值为3；过滤后上LSA‑21大孔树脂，上柱速度为1倍柱体积/小时，上柱完毕以去离子水冲洗至洗脱液无色；再以50%乙醇洗脱至流出液用TLC检查无车叶草苷及绿原酸斑点；将上述含车叶草苷及绿原酸的50%乙醇洗脱液在45‑50℃的温度、﹣0.08MPa的压强下减压浓缩至15公斤稠膏，加入225公斤无水丙酮，室温下动态提取2小时；丙酮提取液过滤后浓缩至14升，室温下析晶得到粗晶1.4公斤，以去离子水重结晶得到车叶草苷纯品1.02公斤，经核磁共振鉴定为车叶草苷，高效液相检测含量为99.5%(面积归一法)。

主要参考资料

[1] 仇佳明, 吴千超, 吕红明, 李扬, 邓旭明, & 冯海华. (2015). 车叶草苷体内外抗炎作用的研究. 中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会.

[2] 刘东锋，万冬梅，杨成东. (2011). 一种车叶草苷的制备方法. CN102241715A.

[3] 马伟, 曾里, 程健, 郭艳, 胡坚, & 冉旭等. (2016). Hplc法测定杜仲茶中车叶草苷含量的研究. 食品与发酵科技, 52(3), 93-96.