D-荧光素钾盐及D-荧光素使用中的常见问题

1、D-荧光素适合做哪些实验？

D-荧光素钾盐和5-氟-荧光素，作为Luciferase的作用底物，常用于以下实验：

报告基因分析；In vivo imaging (动物活体成像)；In vitro imaging (细胞体外分析)；ATP测定；其它luciferase及其基因相关的分析和研究工作。

2、D-荧光素应用于活体成像的基本原理

细胞中D-荧光素酶参与的化学发光反应遵守酶促反应的基本原理，在底物D-荧光素钾过量的情况下，反应产生的光子数（发光量）与细胞中的D-荧光素酶的量成正相关，从而可以推算出细胞的数量。

3、D-荧光素钾盐溶液的稳定性

D-荧光素钾盐易溶于水和缓冲液，溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。

溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5（发生水解作用）或>7.5（发生消旋化作用，D型转化为L型）的情况下，D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气，将加速D-荧光素钾的降解速度。

D-荧光素配成溶液后，在的保存条件（-80°C，pH，无氧气）下，存在固定的降解速度：0.2%/天，因此配成溶液保存的D-荧光素应尽量在1年内使用完。

有水存在的情况下，主要发生消旋化作用，即D-荧光素转化成L-荧光素，有报道称L-荧光素对荧光素酶催化的酶促反应有抑制作用。

4、D-荧光素、D-荧光素钠和D-荧光素钾之间的区别

主要区别在于溶解和分散性能。D-荧光素钾盐在水和缓冲液中的溶解度高，且溶解速度较快，故在一般的生物学试验中常用D-荧光素钾盐。