茵芋苷的制备方法

背景及概述^[1][2]

茵芋苷(skimmin)，是一种香豆素类化合物，又名7‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖氧基香豆素， mp.220‑221℃，为白色针状结晶，分子量324.28274；分子式C₁₅H₁₆O₈。茵芋苷广泛分布于多种植物和柑橘水果中，具有治疗肾功能不全方面的活性。目前临床上治疗肾功能不全的药物主要是Benazepril和Losartan，但主要依赖进口，价格昂贵，并且毒副作用较大，如高血钾，咳嗽严重，降血压作用太弱。茵芋苷在药理试验中与上述合成药物具有相似功效，相近作用强度：在对顺铂造成的小鼠肾损伤模型试验中，茵芋苷的肾保护作用与阳性对照药Benazepril相当。以2，4‑二羟基苯甲醛为初始反应物首先与丙二酸发生Knoevenagel‑Doebner缩合反应然后脱羧酸生成苷元，苷元再与糖供体发生Koenigs‑Knorr 反应，通过六步反应以15％的总收率获得茵芋苷。该方法快捷，收率中等，但副产物较多，产品纯度较低。采用95％乙醇提取、多种有机溶剂依次萃取、反复硅胶柱层析及凝胶柱层析分离得到茵芋苷，该方法仅适用于实验室少量制备，不易工业化。

制备^[1]

一种茵芋苷的制备方法，其特征在于所述方法由下列步骤组成：

(1)取马蹄金全草，室温下用丙酮溶液组织破碎提取3次，每次10‑30分钟，合并提取液，减压浓缩至浸膏；

(2)将浸膏用比例为10∶1的乙酸乙酯‑甲醇混合溶液进行15‑18级逆流萃取，合并萃取液，减压回收溶剂，得萃取物；

(3)将萃取物加水分散，通过聚酰胺树脂柱，30‑60％乙醇洗脱，洗脱液浓缩得粗品；

(4)将粗品用甲醇溶解，上样至硅胶目数为200‑300的中压层析柱，用甲醇‑二氯甲烷混合溶液洗脱，收集目标成分段洗脱液，过滤浓缩，低温干燥即得到茵芋苷。

含量测定^[2]

采用高效液相色谱法同时测定星毛冠盖藤中茵芋苷、7-羟基香豆素、7-羟基-8-甲氧基香豆素的含量，具体方法如下：

1）色谱条件与系统适用性试验。

所述色谱条件为：色谱柱：C18（5μm，250×4.6mm）；检测波长：320nm；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.2%磷酸水溶液，梯度洗脱；柱温：25℃；流速：1.0 ml/min；进样量：10μL。所述梯度洗脱程序为：0~30min，流动相A的体积分数从5%线性到变化到40%；30~ 31min，流动相A的体积分数从40%线性变化到5%，31~40min，流动相A的体积分数保持在5%。

2）对照品溶液的制备：精密称取茵芋苷对照品、7-羟基香豆素对照品和7-羟基-8-甲 氧基香豆素对照品，加甲醇超声溶解并制备成对照品溶液，浓度分别为：茵芋苷0.1032mg/ ml，7-羟基香豆素0.1022mg/ml和7-羟基-8-甲氧基香豆素0.1112mg/ml。

3）供试品溶液的制备：精密称取星毛冠盖藤药材粉末1g，置于150ml锥形瓶中，精 密加入80%的甲醇(v/v)25ml，称定重量，加热回流提取60min，用80%甲醇(v/v)补足减失的重量，溶液过滤，精密量取续滤液2ml置10ml量瓶中，用80%甲醇(v/v)定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

4）测定供试品溶液中茵芋苷、7-羟基香豆素、7-羟基-8-甲氧基香豆素的含量：采用对照品溶液绘制进样量—色谱峰面积的标准曲线，测定星毛冠盖藤中三种成分的色谱峰面积，并利用标准曲线计算出茵芋苷、7-羟基香豆素、7-羟基-8-甲氧基香豆素的含量即可。

主要参考资料

[1] CN201110218660.3 一种茵芋苷的制备方法

[2] CN201710261808.9 星毛冠盖藤中香豆素类成分的含量测定方法