JeKo-1的应用

背景^[1-3]

JeKo-1是一位套细胞淋巴瘤患者的巨细胞变种显示白血病转变，从其外周血单核细胞出发建立了MCL细胞株JeKo-1。JeKo-1细胞EB病毒阴性，并表达一种B细胞表型的IgM。JeKo-1细胞过表达cyclin D1、Bcl-2、c-Myc及Rb蛋白。Bcl-1/J(H)基因重排得到了PCR证实，JeKo-1细胞在SCID小鼠中高成瘤。

JeKo-1

JeKo-1培养步骤：

一、复苏JeKo-1细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

二、JeKo-1细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a）、对于JeKo-1细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗JeKo-1细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打JeKo-1细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将JeKo-1细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

三、JeKo-1细胞冻存：

1、JeKo-1细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待JeKo-1细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3、用适量的冻存液重悬JeKo-1细胞，并放置于冻存管中；

4、先将JeKo-1细胞冻存管放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃

应用^[4][5]

JeKo-1可以用于苯丁酸氮芥联合伊布替尼对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的作用研究

研究苯丁酸氮芥(Chlorambucil)与伊布替尼(Ibrutinib)对套细胞淋巴瘤(Mantle cell lymphoma,MCL)细胞株Jeko-1的抑制及诱导凋亡作用,探讨两药联合是否有协同作用,并对其诱导凋亡的作用机制进行研究,以期为MCL,特别是复发难治性的MCL,提供一种潜在可行的新的治疗方案,进一步改善其预后,提高其总体生存期。方法在T25细胞培养瓶中培养Jeko-1细胞株,待培养瓶中的细胞密度长至80%时,将其离心、重悬,然后均匀种板于6孔板或96孔板中,根据不同的实验目的,进行不同的实验干预。

1. 不同浓度的苯丁酸氮芥及不同浓度的伊布替尼对Jeko-1细胞的抑制及诱导凋亡作用用不同浓度苯丁酸氮芥(3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L)及不同浓度的伊布替尼(3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L)分别干预Jeko-1细胞,并设立对照组,各组分别培养24h,48h,72h,CCK-8法检测各组细胞增殖的情况,计算其抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。

2.不同浓度的苯丁酸氮芥及伊布替尼的联合应用对Jeko-1细胞的抑制及诱导凋亡作用根据1.的实验结果,采用两药有效低剂量(单药抑制率<50%)进行联合应用,设置空白组、苯丁酸氮芥单药组、伊布替尼单药组、苯丁酸氮芥+伊布替尼联合组,主要实验干预为不同浓度的苯丁酸氮芥(3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L)与相同浓度的伊布替尼(3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L)联合应用于Jeko-1细胞,培养72小时后,CCK-8法检测细胞活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。

3.苯丁酸氮芥与伊布替尼的联合应用对Jeko-1细胞的作用机制研究采用Western Blot分别检测第二部分实验中空白组、苯丁酸氮芥单药组、伊布替尼单药组、苯丁酸氮芥+伊布替尼联合组的CASPASE-3、BCL-2、PI3K、p-AKT及AKT表达水平。

结果:1.不同浓度的苯丁酸氮芥及不同浓度的伊布替尼对Jeko-1细胞的抑制及诱导凋亡作用单独用苯丁酸氮芥或伊布替尼处理Jeko-1细胞24h,48h,72h,细胞的活性均降低,其抑制率随着干预药物浓度的增大及干预时间的延长而增加,且凋亡率随着用药浓度的增加而呈递增趋势。其中,(3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L)的苯丁酸氮芥处理Jeko-1细胞72h后,细胞的抑制率分别为(17.41±1.14)%、(35.91±1.66)%、(51.76±1.98)%、(64.48±2.09)%、(82.86±2.88)%,凋亡率分别为(10.07±0.84)%、(22.13±3.01)%、(44.43±5.01)%、(62.77±3.95)%、(77.17±2.35)%。而(3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L)的伊布替尼处理Jeko-1细胞72h后,细胞的抑制率分别为(7.71±1.06)%、(15.28±2.20)%、(41.32±3.17)%、(79.70±3.43)%、(97.25±2.69)%,凋亡率分别为(7.60±0.44)%、(13.43±1.63)%、(35.10±2.21)%、(55.67±1.53)%、(98.57±1.70)%,与对照组相比,差异具有统计学意义(p值均<0.05)。当两种药物浓度大于12.5μmol/L,其凋亡率及抑制率均能够>50%。

2.不同浓度的苯丁酸氮芥及伊布替尼的联合应用对套Jeko-1细胞的抑制及诱导凋亡作用采用较低有效剂量的苯丁酸氮芥及伊布替尼进行等量联合应用。即苯丁酸氮芥(3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L)与相同浓度的伊布替尼(3.125μmol/L,6.25μmol/L,12.5μmol/L)联合,与单一用药相比,两药联合对Jeko-1细胞的抑制率分别增加至(23.37±3.12)%、(62.58±3.94)%、(93.51±2.50)%,而凋亡率分别增加至(15.95±0.78)%、(54.75±0.07)%、(85.05±1.20)%,联合用药组与单独给药组相比,差异均有统计学意义(p<0.05)。

3.苯丁酸氮芥与伊布替尼的联合应用对Jeko-1细胞的作用机制研究苯丁酸氮芥单药处理Jeko-1细胞后,细胞的BCL-2、PI3K、p-AKT/AKT表达减弱,CASPASE-3表达增强,伊布替尼对上述蛋白表达趋势与苯丁酸氮芥结果相似。而联合用药组能够减弱BCL-2、PI3K、p-AKT/AKT的表达,而进一步显著提高CASPASE-3的表达,联合用药组与单独给药组相比,差异均有统计学意义(p<0.05)。

参考文献

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[5]蔡妮娜.苯丁酸氮芥联合伊布替尼对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的作用研究[D].福建医科大学,2021.