月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤的应用

背景^[1-3]

月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤简称LST培养基，是大肠菌选择性液体培养基，用于检测食品、水、奶制品中的大肠菌群和大肠埃希氏菌。

月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤

月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤原理：

大肠菌群时革兰氏阴性杆菌，能够快速发酵乳糖产气（水不溶性气体）。更为准确的定义是35°C条件下能够在LST培养基和BGLB培养基中生长，并且发酵乳糖产气的革兰氏阴性杆菌。在44.5°C条件下，还能够在EC肉汤中发酵乳糖产气的属于大肠菌群的一个子集——粪大肠菌群。

表面活性剂如胆盐、蓖麻油酸钠，一直以来作为抑制成分，用于配制选择性培养基。十二烷基硫酸钠（SDS）在大肠菌选择性培养基中效果，完全阻止革兰氏阳性菌生长。十二烷基硫酸盐胰蛋白示肉汤可以在小量接种的情况下支持大肠菌的密集生长并产生大量气体。该培养基另外一个优点是可用于直接检测吲哚的存在。如果需要，可以在培养后加入指示剂。

向培养基中加入4-甲基伞型酮-β-D-葡糖苷酸（MUG）可以提高检测大肠埃希氏菌的灵敏度。不产气的大肠埃希菌菌株也能用MUG鉴别。MUG是一种生荧光化合物。大肠埃希氏菌具有合成Beta-葡萄糖苷酶的能力，水解MUG生成荧光化合物。在366nm波长的紫外灯下，培养基显荧光，实现大肠埃希氏菌的快速检测。

月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤用法：

称取本品35.6克，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装到有倒立发酵管的20mm×150mm试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15分钟，备用。

应用^[4][5]

月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤可以用于阪崎克罗诺杆菌的检测及耐酸机制研究

阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)是一种可以在人及动物肠道内寄生生存的革兰阴性菌,该菌可以引发新生儿脑膜炎、坏死性小肠结肠炎和菌血症等严重疾病,且感染后死亡率高达40%-80%,引起全球的广泛关注。

研究发现,感染来源主要是受阪崎肠杆菌污染的奶粉,而克罗诺杆菌的传统分离方法存在一定的缺陷,高效的生物学及分子生物学技术的发展则对克罗诺杆菌菌种的检测和分型以及预防和治疗阪崎克罗诺杆菌的感染具有重要意义。食源性致病菌的耐酸特性也是其发挥其致病性的关键前提条件之一。目前,国内对其酸胁迫应答机制研究还鲜有报道。

首先通过添加万古霉素、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷、头孢菌素和蔗糖等物质建立了一种优于DFI(Druggan-Forsythe-Iversen)和改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(mLST)的克罗诺杆菌分离方法,该方法、DFI和mLST方法对克罗诺杆菌的灵敏度分别为100%、87.5%和87.5%：而特异性分别为88.8%、77.7%和87.5%。然后,基于TaqI单酶切gluB基因片段进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,建立一种能鉴定克罗诺杆菌的同时还可以快速、准确地区分都柏林克罗诺杆菌(Cronobacter dublinensis),丙二酸盐阳性克罗诺杆菌(Cronobacter malonaticus),穆汀斯克罗诺菌(Cronobacter muytjensii)和阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)的种间特异性分子分型靶标技术。

最后,本文探索性通过菌体接合方法成功建立了阪崎克罗诺杆菌的基因敲除方法,获得外膜蛋白OmpW突变株△OmpW和谷氧还蛋白GrxB突变株△GrxB,并通过耐酸性、形态特征和生物膜相关指标变化初步探讨OmpW、GrxB在阪崎克罗诺杆菌中耐酸变化中的作用,发现这两个基因与该菌的耐酸性有关,为进一步开展OmpW、GrxB在该菌致病中的作用机制提供参考数据。

参考文献

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[5]凌娜.阪崎克罗诺杆菌的检测及耐酸机制研究[D].合肥工业大学,2016.