抗体亲和纯化洗脱液的应用

概述^[1]

抗体是机体对体内存在的外来分子、微生物的抗原物质刺激，由Ｂ淋巴细胞分化的浆细胞产生的一类糖蛋白，可以是以与膜结合的形式作为抗原受体结合于B细胞表面；也可以是以分泌的形式存在于血液或体液中，作为特异性体液免疫的效应分子，参与清除抗原过程中的分子间相互作用。

抗体作为一种特殊的蛋白质分子，近年来作为药物、体外诊断试剂、免疫亲和层析配基、药物载体工具等得到了长足的发展，同时抗体也在医学、生命科学、生物工程等领域有着广泛的应用。

缓冲液的配制^[2]

平衡缓冲液:pH 7.4, 20 mmol/L磷酸盐缓冲液 (PBS, 分别含0.15、0.25、0.3、0.75 mol/LNaCl) 。洗脱缓冲液:pH 2.8, 0.1 mol/L甘氨酸缓冲液。中和缓冲液:pH 9.0, 1 mol/L Tris-HCl缓冲液。

一些纯化载量较少的抗体可适当提高需平衡缓冲液中的盐浓度 (可达3 mol/L) 和pH值 (可达pH 8.2) , 以提高抗体和介质的吸附力。但是, 有时高pH会增加杂蛋白吸附, 使用时应根据实际情况调节。

以上缓冲液使用前均需经0.45μm滤膜过滤。

应用^[2]

(a) 装柱:偶联了重组蛋白A的Sepharose4FF填料装柱后, 用洗脱缓冲液洗3~5个柱床体积洗掉乙醇和杂质, 用平衡缓冲液流洗5~10个柱床体积平衡柱。

(b) 上样:将含免疫抗体IgG的兔血清样品上柱, 均匀上样, 可将流出液反复上样, 以更好地结合IgG (样品先用平衡缓冲液稀释5~10倍, 以保证样品液的pH和平衡缓冲液接近) 。

(c) 洗涤:用平衡缓冲液再洗5~10个柱床体积, 直至基线趋于平缓。

(d) 洗脱:分别以相对快速和慢速加入洗脱缓冲液, pH降至约3.0, IgG从填料上洗脱下来, 立即用上述中和缓冲液中和洗脱液至pH为中性, 防止洗脱缓冲液的酸性环境引起抗体失活。

参考文献

[1] 纳米抗体用于亲和纯化传统抗体的研究

[2] 蛋白A的固定及在抗体亲和纯化中的应用.唐秀