小鼠腹腔巨噬细胞的主要获取方法

小鼠腹腔巨噬细胞的主要获取方法^[1]

从小鼠腹腔提取，现有的提取方法有两种，一种是直接腹腔灌洗后贴壁培养；另一种是先向小鼠腹腔内注射刺激物制造无菌炎症环境以积聚巨噬细胞，再灌洗腹腔获取细胞并贴壁培养。直接灌洗腹腔所得的细胞数量甚少，并不是理想的提取方法。以炎症刺激巨噬细胞聚集再灌洗所得的细胞一直以来被认为是炎性甚至变异的，而对于上述两种方法提取的小鼠腹腔巨噬细胞之间的生物学差异有待进一步研究。

３％巯基乙酸盐肉汤诱导法高效提取小鼠腹腔巨噬细胞

方法：

选取 3２只健康昆明小鼠，随机分为 ４组，每组 ８只，分别采用以下 ４种不同方法获得腹腔巨噬细胞：ＰＢＳ直接灌洗小鼠腹腔（ＰＢＳ组）；含 １０％血清的 ＲＰＭＩ１６４０培养液注入小鼠腹腔，３０ｍｉｎ后灌洗小鼠腹腔（培养液组）；６％淀粉肉汤注入小鼠腹腔，每天 １次，３ｄ后以 ＰＢＳ灌洗腹腔（淀粉肉汤组）；３％巯基乙酸盐肉汤注入小鼠腹腔，每天 １次，３ｄ后以ＰＢＳ灌洗腹腔（巯基乙酸盐组）；将各组所获细胞分别转入含 １０％血清的 ＲＰＭＩ１６４０培养基中贴壁培养，比较细胞形态、数量、吞噬能力、纯度以及活性。

牛磺酸对小鼠腹腔巨噬细胞功能调节作用^[2]

方法：

收集小鼠腹腔巨噬细胞, 调整细胞浓度为2×105/mL, 分为5组, 即正常对照组, LPS对照组 (LPS终浓度为1μg/mL) 和低、中、高牛磺酸剂量组 (牛磺酸的终浓度分别为5、50和500μg/mL) , 培养24 h后ELISA法检测细胞上清中IL-12、TNF-α、IL-1、IL-6含量;瑞氏染色法检测并计算巨噬细胞对白色葡萄球菌的吞噬率和吞噬指数、Griess法检测吞噬葡萄球菌后细胞上清中NO的含量。结果 各剂量牛磺酸组的腹腔巨噬细胞TNF-α和IL-6含量均高于正常对照组 (P <0. 05) , 高剂量牛磺酸组IL-12的含量高于对照组 (P <0. 05) , 各剂量的牛磺酸组IL-1含量与对照组比较没有统计学意义;中、高剂量的牛磺酸组巨噬细胞对葡萄球菌的吞噬率、吞噬指数和上清中NO的含量均高于正常对照组 (P <0. 05) 。

参考文献

[1] 耿田欣，臧光耀，严金川．３％巯基乙酸盐肉汤诱导法高效提取小鼠腹腔巨噬细胞［Ｊ］．江苏大学学报（医学版），２０１９，２９（１）：４５－４８

[2] 牛磺酸对小鼠腹腔巨噬细胞功能调节作用的体外研究.王亚敏