一种花生四烯酸乙醇胺的纯化方法

花生四烯酸乙醇胺是人类发现的个内源性大麻素类似物，近年来，关于花生四烯酸乙醇胺含量的改变和疾病之间的关系的文献报道越来越多，有研究者认为，大麻受体内源性主要配体花生四烯酸乙醇胺在许多疾病中可能扮演了疾病前兆性指示物或疾病发生标志物的角色。

目前对脂肪酸单乙醇酰胺的功效、生物代谢途径的研究大多基于体内提取，含量低，处理复杂。若能够进行体外合成，并对其进行富集纯化得到较高纯度的花生四烯酸乙醇胺，不仅有利于科学基础研究，还将有望应用于药物治疗。

根据目标产物合成途径的不同，其分离提纯的方法也存在差异。采用油脂法制备花生四烯酸乙醇胺的方法具有原料来源广泛，设备投资少，适合工业化的特点。但反应的粗产物中除了包含反应生成的副产物甘油和未发生反应的单乙醇胺外，还含有较多的其他饱和或不饱和的脂肪酸乙醇酰胺。

纯化方法

这种花生四烯酸乙醇胺的纯化方法包括，制备混合脂肪酸乙醇酰胺；利用尿素分离不同饱和度的脂肪酸单乙醇酰胺；减压过滤分离固液两相得到滤液；所述滤液经萃取浓缩后得到富含花生四烯酸乙醇胺的不饱和脂肪酸单乙醇酰胺。

作为本发明所述纯化方法的一种优选方案，其中：

制备混合脂肪酸单乙醇酰胺的原料为微生物藻油和单乙醇胺，所述微生物藻油中花生四烯酸含量以质量百分比计占30％～40％；

所述微生物藻油和单乙醇胺按照摩尔比为1:1～1:30进行混合；

在所述微生物藻油和单乙醇胺混合之后，还包括，添加反应底物总质量的0.1～0.5％的碱性催化剂，所述碱性催化剂为甲醇钠的甲醇溶液；

在添加反应底物总质量的0.1～0.5％的碱性催化剂之后，还包括，添加正己烷、无水乙醇或两者的混合溶液，在25～60℃下搅拌反应0.5～6h；

所述利用尿素分离不同饱和度的脂肪酸单乙醇酰胺，包括，按照体积和质量比，95％乙醇：尿素＝2～8：1分别取95％乙醇和尿素，60～75℃水浴中加热回流至尿素完全溶解，再按照质量比混合脂肪酸乙醇酰胺：尿素＝1：2～6加入反应粗产物，继续加热回流至澄清透明，得到混合脂肪酸单乙醇酰胺-尿素-乙醇混合液；

在得到混合脂肪酸单乙醇酰胺-尿素-乙醇混合液之后，还包括，将所得混合脂肪酸乙醇酰胺-尿素-乙醇混合液冷却至室温，静置于-40℃～10℃条件下低温结晶6h～24h，然后减压抽滤分离，收集滤液，得到富含花生四烯酸乙醇胺的多不饱和脂肪酸单乙醇酰胺-尿素-乙醇混合液；

在得到富含花生四烯酸乙醇胺的多不饱和脂肪酸单乙醇酰胺-尿素-乙醇混合液之后，还包括，将所得多不饱和脂肪酸单乙醇酰胺-尿素-乙醇混合液加入无水乙醚和55～75℃热水，萃取，分离合并有机相，干燥减压浓缩，得到液体油状物，去除溶剂，即得到纯度在45％～65％的花生四烯酸乙醇胺产品；

所述干燥，采用无水Na2SO4进行干燥；

在所述萃取之后，分离合并有机相之前，还包括，得到水相为尿素溶液，经一次低温结晶，滤液浓缩后二次结晶可得到尿素晶体回收干燥利用。

本发明以富含花生四烯酸的微生物藻油作为合成花生四烯酸乙醇胺的酰基供体，采用尿素对反应后的混合脂肪酸单乙醇酰胺粗产物进行纯化，该方法具有操作简便、成本低、试剂与尿素易得且可回收利用，反应条件温和等优点，为进一步富集纯化高纯度的花生四烯酸乙醇胺提供参考价值。