HuT 102细胞：人T淋巴瘤细胞系的应用

背景^[1-3]

HuT 102细胞：人T淋巴瘤细胞系是一株T细胞淋巴瘤细胞系。HuT 102细胞具有成熟T细胞系的特征，细胞表面呈现IL-2活性、E花环阳性，表面免疫球蛋白、EBV核抗原和TdT反应阴性。HuT 102细胞还可释放与T细胞淋巴瘤相关的单一C型逆转病毒，即HTLVI病毒。

HuT 102细胞：人T淋巴瘤细胞系

HuT 102细胞：人T淋巴瘤细胞系复苏：

1.将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

2.在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

HuT 102细胞：人T淋巴瘤细胞系传代培养：

1.吸取并弃掉培养瓶中培养基。

2.加入1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3至5分钟（此处为12.5 cm2培养瓶所用体积，可根据实际情况增减用量）。

3.加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落，并使细胞分散。

4.离心200x g/5 min，去除上清后，取适量的培养基将细胞重悬,取适量悬液置于新的培养瓶中，并加入新鲜细胞完全培养基至总体积为4mL。

5.将细胞置于含有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养。

冻存细胞操作步骤：

1.将冻存管置于37℃水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约2分钟。

2.一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用70%酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。

3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中，离心200×g/5-10 min，用真空泵去除含有冻存液的上清。

4.用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。

5.将细胞置于含有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养。

应用^[4][5]

HuT 102细胞:人T淋巴瘤细胞系可以用于雷公藤内酯醇通过P38MAPK信号通路诱导皮肤T细胞淋巴瘤Hut102细胞的凋亡

观察雷公藤内酯醇(Triptolide,TP)对皮肤T细胞淋巴瘤Hut102细胞株的增殖和凋亡率的影响,进一步观察雷公藤内酯醇对Hut102细胞株的凋亡诱导作用是否涉及到P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路和这条信号通路上的关键蛋白。

方法:采用MTT法检测不同浓度的雷公藤内酯醇干预后的Hut102细胞的增殖抑制率。利用Annexin v-FITC/PI双染流式细胞术检测不同浓度的雷公藤内酯醇以及取其中一个浓度组预先加入P38MAPK抑制剂SB203580处理后Hut102细胞的凋亡率。利用Western印迹法检测不同浓度雷公藤内酯醇以及取其中一个浓度组预先加入P38MAPK抑制剂SB203580处理后的Hut102细胞中磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(P-P38MAPK)、caspase-3蛋白激酶、热休克蛋白27(HSP27)的表达量。

结果:雷公藤内酯醇可抑制Hut102细胞的增殖和诱导Hut102细胞的凋亡,并呈时间和剂量依赖方式(与对照组比较,P<0.05)。雷公藤可增加磷酸化P38MAPK、caspase-3(17KD)蛋白激酶的表达,同时抑制HSP27蛋白的表达,取其中一浓度组用P38MAPK特异性抑制剂SB203580预处理后,雷公藤内酯醇诱导Hut102细胞的凋亡率明显下降,磷酸化P38MAPK、caspase-3(17KD)蛋白激酶的表达降低,HSP27蛋白的被抑制效应减弱(与对照组比较,P<0.05)。

结论:雷公藤内酯醇可诱导Hut102细胞凋亡,该作用可被P38MAPK特异性抑制剂SB203580部分抑制,提示雷公藤内酯醇可能通过激活P38MAPK信号通路使部分Hut102细胞产生凋亡,雷公藤内酯醇可以抑制Hut102细胞中高表达的小分子热休克蛋白27,HSP27可能是P38MAPK信号通路上的一个重要蛋白。

参考文献

[1]Triptolide:An inhibitor of a disintegrin and metalloproteinase 10(ADAM10)in cancer cells[J].Ramani Soundararajan;;Ria Sayat;;George S.Robertson;;Paola A.Marignani.Cancer Biology&Therapy,2009(21)

[2]Caspase 3 is involved in the apoptosis induced by triptolide in HK-2 cells[J].Bin Shu;;Weigang Duan;;Jincheng Yao;;Jingfeng Huang;;Zhenzhou Jiang;;Luyong Zhang.Toxicology in Vitro,2009(4)

[3]Triptolide induces apoptosis in human anaplastic thyroid carcinoma cellsby a p53-independent but NF-κB-related mechanism[J].Wenbo Zhu;;Haiyan Hu;;Pengxin Qiu;;Guangmei Yan.Oncology Reports,2009(6)

[4]Triptolide inhibits interferon-γ-induced programmed death-1-ligand 1 surface expression in breast cancer cells[J].Mei Liang;;Jian Fu.Cancer Letters,2008(2)

[5]谢会霞.雷公藤内酯醇通过P38MAPK信号通路诱导皮肤T细胞淋巴瘤Hut102细胞的凋亡[D].重庆医科大学,2010.