人肾母细胞瘤细胞的应用

背景^[1-3]

人肾母细胞瘤细胞又称为肾胚胎瘤、Vilms肿瘤，是目前小儿泌尿生殖系统中最常见的恶性肿瘤，大多数发生于小儿，个别情况下也有成人或者老年人发生，通常该病跟遗传可能具有一定的联系，也有一些散发的病例。肾母细胞瘤通常有可能和一些临床综合征相伴发，这种情况下通常需要针对肾母细胞瘤完善超声、CT等影像学检查。大多数肿瘤起源于后肾母细胞，比较常见于单侧肾脏多发，5%-10%的患者累及双侧肾脏。

人肾母细胞瘤细胞

从胚胎学上来说，持续存在的后肾胚基未能分化为肾小球及肾小管并呈不正常的增殖、发展为肾母细胞瘤。肿瘤可以遗传的形式或非遗传的形式出现。若属于遗传形式，则肿瘤发生得更早，更易为双侧性及多中心形式。所有双侧性肾母细胞瘤及１５％～２０％单侧病变与遗传有关，但Belasc０等的病因复习中，遗传因素并不重要，仅１％～２％的患者有家族史。

肿瘤体积大，灰白色，瘤组织常突破肾被膜侵及肾周围脂肪组织，甚至扩散至肠系膜根部。切面隆起，实性或囊性，色彩多样，与肿瘤的成分有关。部分质硬，灰白色，部分质软，粘液样，部分可见透明软骨样组织，并有钙化、出血和坏死灶。镜下，肿瘤组织有三种成分：未分化的肾母细胞（nephroblastic cells），体积小，呈梭形，胞浆少，核染色深，肉瘤样，弥漫分布；在弥漫性分布的未分化梭形细胞中，可见由肾母细胞分化而来的未成熟的肾小球和肾小管样结构；不同分化程度的横纹肌及平滑肌、胶原纤维、软骨、骨和脂肪组织等间叶组织（mesenchymal tissues），这些间叶组织的分化程度与预后密切相关。

根据肿瘤所含成分比例的不同，可分为三型，未分化肾母细胞占优势的为肾母细胞型（nephroblastic type）；肾小球和肾小管样结构占优势的为上皮型（epitheloid type）；横纹肌等间叶组织占优势的为间叶型（mesenchymal type）。

肾母细胞瘤临床表现为偶然发现的腹部肿块，偶有腹痛、血尿和高血压，一部分患者可以出现恶心、呕吐等胃肠道症状，甚至出现一些急腹症的表现，因此在临床上应予以重视。这是一种恶性实体肿瘤，其对于放疗、化疗、手术治疗相对来说效果比较好。

应用^[4][5]

人肾母细胞瘤细胞可以用于miR-200c及其靶基因EP300参与肾母细胞瘤增殖与侵袭的分子机制

从肾母细胞瘤组织和细胞miRNA芯片中筛选出miR-200c作为肾母细胞瘤候选miRNA,探讨miR-200c在肾母细胞瘤增殖和侵袭中的作用机制,主要内容:(1)筛选并验证肾母细胞瘤增殖和侵袭相关的miRNA;(2)预测并鉴定miR-200c的靶基因,明确miR-200c通过靶基因在肾母细胞瘤增殖和侵袭中发挥的作用;(3)确定miR-200c靶基因EP300的信号通路,探讨PI3K/AKT/FOXO通路在肾母细胞瘤增殖和侵袭中的作用。

研究方法1.肾母细胞瘤组织和细胞中miRNAs筛选及验证。2.mR200c靶基因的预测和鉴定。3.miR-200c对肾母细胞瘤细胞生物学行为的影响。4.miR-200c参与的肾母细胞瘤信号通路的检测。

研究结果1.肾母细胞瘤增殖和侵袭相关miRNA的筛选及鉴定(1)送检6张miRNA芯片结果表明,与瘤旁肾组织相比,在肾母细胞瘤组中共筛选出27个表达均下调的miRNA,其中包括miR-200c。(2)利用荧光定量PCR检测24例配对新鲜肾母细胞瘤组织及在2株肾母细胞瘤细胞中miR-200c的表达,miR-200c在肾母细胞瘤组织中的表达显著低于瘤旁肾组织,2株瘤细胞低于正常胚胎肾293T细胞,具有统计学意义。

2.miR-200c靶基因的预测及鉴定(1)通过四个常用在线预测数据库预测与miR-200c相互作用的靶基因,结果显示EP300与增殖和侵袭相关,因此假设EP300作为miR-200c的靶基因。(2)采用双荧光素酶报告基因实验表明miR-200c能够与EP300 3’UTR结合,从而抑制荧光素酶的活性。(3)荧光定量PCR和Western blot结果表明miR-200c及其靶基因EP300的表达呈显著负相关。

参考文献

[1]Clinical,pathological and loss of heterozygosity differences in Wilms tumors between Asian and non‐Asian children[J].Benjamin N.Loke;;Meng Kang Wong;;Khawn D.Tawng;;Chick Hong Kuick;;Sudhanshi Jain;;Derrick Lian;;Elizabeth Wagner;;Yuhan Zou;;Visveswari Ganesan;;Siam Wee Sim;;York Tien Lee;;Francis Chin;;Mei Yoke Chan;;Ah Moy Tan;;Bin Tean Teh;;Shui Yen Soh;;Kenneth T.E.Chang;;Amos H.P.Loh.International Journal of Cancer,2019(6)

[2]Paternally inherited WT1 mutation plus uniparental disomy of 11p may be an essential mechanism for development of WT1‐mutated familial Wilms tumor[J].Yuya Sato;;Masayuki Haruta;;Yasuhiko Kaneko;;Yoshimasa Nakasato;;Hidemitsu Kurosawa;;Shigemi Yoshihara.Pediatric Blood&Cancer,2019(1)

[3]miR-3607-3p suppresses non-small cell lung cancer(NSCLC)by targeting TGFBR1 and CCNE2[J].Peng Gao;;Huan Wang;;Jiarui Yu;;Jie Zhang;;Zhao Yang;;Meiyue Liu;;Yi Niu;;Xiaomei Wei;;Wei Wang;;Hongmin Li;;Yadi Wang;;Guogui Sun.PLOS Genetics,2018(12)

[4]Dual BRD4 and AURKA Inhibition Is Synergistic against MYCN-Amplified and Nonamplified Neuroblastoma[J].Joshua Felgenhauer;;Laura Tomino;;Julia Selich-Anderson;;Emily Bopp;;Nilay Shah.Neoplasia,2018(10)

[5]曹娟.miR-200c及其靶基因EP300参与肾母细胞瘤增殖与侵袭的分子机制[D].南方医科大学,2019.