ACHN细胞|人肾细胞腺癌细胞(提供Str鉴定报告)的使用说明

ACHN细胞|人肾细胞腺癌细胞(提供Str鉴定报告)的使用说明^[1-3]

ACHN细胞人肾细胞腺癌细胞(提供Str鉴定报告)1979年建系，源自一名22岁患有肾细胞腺癌的白人男性的胸腔积液。干扰素可抑制ACHN（人肾细胞腺癌细胞）的生长，该细胞多用于干扰素及其诱导剂的抗增殖研究。

近年来，大量研究表明STR基因分型方法是进行细胞交叉污染和性质鉴定的最有效和准确的方法之一，STR基因分型应用于细胞鉴定已被ATCC等机构强烈推荐。美国的ATCC细胞库、德国的DSMZ细胞库以及日本的JCRB细胞库等为STR分型提供了各细胞株的数据供比对。越来越多的杂志在投稿时要求撰稿人提供细胞STR分析数据，STR已被ATCC等机构作为细胞鉴定的金标准。

ACHN细胞人肾细胞腺癌细胞(提供Str鉴定报告)

什么是细胞系STR鉴定？

STR（Short tandem repeats，短串联重复序列）基因位点由长度为3~7个碱基对的短串联重复序列组成，这些重复序列广泛存在于基因组中，可作为高度多态性标记，被称为细胞的DNA指纹，其可通过PCR（聚合酶链式反应）来检测。

STR基因座位上的等位基因可通过扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来区分，在毛细管电泳分离之后可通过荧光检测来识别。随后通过一定的计算方法，所得的STR分型结果与权威的细胞STR数据库比对，从而推算出样品所属的细胞系。

STR基因分型已被ICLAC、ATCC等权威机构作为金标准应用于细胞鉴定，目前主要基于国际身份认证委员会的标准。依据该标准，可以通过多重荧光PCR技术，对人源常见的20个STR位点以及1个性别决定位点进行检测。

ACHN（人肾细胞腺癌细胞）培养步骤

一．ACHN（人肾细胞腺癌细胞）培养基及培养冻存条件准备：

1）MEM+10%FBS+1%P/S

2）培养条件：Atmosphere:Air,95%;CO2,5%，Temperature:37℃。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

4）换液：2 to 3 times per week.

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物（mingzhoubio）按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

参考文献

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[3]Secreted protein acidic and rich in cysteine antagonizes bufalin?inducedapoptosis in gastric cancer cells[J].Aodi Li;;Xiujuan Qu;;Zhi Li;;Jinglei Qu;;Na Song;;Yanju Ma;;Yunpeng Liu.Molecular Medicine Reports,2015(2)