1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺的制备工艺

简介

1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺多用作脂质体的载体，其具有无毒性和与DNA的复合物在血清中的高稳定性，迄今为止备受关注。例如：将1，2-二醇酰基-sn-甘氨酸-3-磷酸乙醇酰胺-N-十二烷胺（12PE）与DOPC的混合物以自组装的方式，再与金属阳离子形成配合物，进一步促进DNA缩合[1]。

图1 1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺。

合成

图2 1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺的合成路线[2]。

在5ml无水氯仿/甲醇/三乙胺溶剂混合物（4.5:0.5:0.05 v/v）中，用20倍摩尔过量的NHS/EDC（1:1摩尔比）活化6毫克MAL-PEG（3000）-MMP2-COH过夜。在4°C氮气保护下，使活化的MAL-PEG（3000）-MMP2-NHS与10倍摩尔过量的DOPE反应2小时。使用氯仿/甲醇（4:1 v/v）作为流动相，在制备型铝TLC板（硅胶60 F254，20 x 20 cm，Merck）上纯化反应。纯化冷冻干燥的残留物，并在−20°C下储存，以获得产品1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺。合成路线如图2所示。

图3 1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺的合成路线[3]。

向1-油酰基-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺（4μmol）和2-（油酰基硫基）-N，N，N-三甲基乙烷-1-胺氯化物（6μmol）的混合物中加入pH=10.6的Na2CO3/NaHCO3缓冲液（8 mL）将反应在37°C下进行5小时，以获得产品1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺。合成路线如图3所示。

图4 1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺的合成路线。

将1毫克可裂解MMP2肽（NH2-Gly-Pro-Leu-Gly-Ile-Ala-Gly-Gln-COOH）和6.25毫克MAL-PEG（3000）-NHS（O-[N-（6-马来酰亚胺基己酰基）氨基乙基]-O’-[3-（N-琥珀酰亚胺基氧基）-3-氧代丙基]聚乙二醇3000）（1:1.5摩尔比）在1毫升碳酸盐缓冲液（1 mM，pH 8.5）中混合。将混合物在4°C下搅拌过夜。在透析管上用10体积0.1mM碳酸盐缓冲液在4°C下纯化缀合肽24小时，然后通过配备紫外检测器和C18柱（Agilent，十八烷基，5μm粒径，L×I.D.25 cm×4.6 mM）的高效液相色谱系统进行纯度确认。在环境温度下以1ml/min的流速分析适用于梯度洗脱条件。加入流动相A为含0.1%TFA的乙腈，流动相B为0.1%TFA水溶液。在溶液A的5%开始洗脱混合物，并在30分钟内以溶液A的100%结束。将检测器波长和注射体积分别设置为220 nm和20μl。纯化冷冻干燥的残留物，并在−20°C下储存，以获得产品1，2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺。合成路线如图4所示。

参考文献

[1] M. Pisani, G. Mobbili, I.F. Placentino, A. Smorlesi, P. Bruni, Biophysical Characterization of Complexes of DNA with Mixtures of the Neutral Lipids 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-hexanoylamine or 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-dodecanoylamine and 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine in the Presence of Bivalent Metal Cations for DNA Transfection, JOURNAL OF PHYSICAL CHEMISTRY B 115(34) (2011) 10198-10206.

[2] Gholamian Dehkordi, Neda; et al. Intelligent TAT-coupled anti-HER2 immunoliposomes knock downed MDR1 to produce chemosensitize phenotype of multidrug resistant carcinoma. Journal of Cellular Physiology (2019), 234(11), 20769-20778.

[3] Liu, Luping; et al. Enzyme-free synthesis of natural phospholipids in water. Nature Chemistry (2020), 12(11), 1029-1034.