人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)ELISA试剂盒适用于体外定量检测血清、血浆或其它相关生物液体中天然和重组人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)的浓度。

试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)抗体与结合在包被抗体上的人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)的浓度。

人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)ELISA试剂盒

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于ANCA相关性血管炎肾损伤伴狼疮性肾炎的临床病理特征及预后分析研究

研究AASV伴LN患者的临床病理特征、治疗及预后情况。

方法:选取AASV伴LN患者29例。同时选取同等数量的经肾活检确诊的无LN的AASV患者及无AASV的LN患者作为对照。收集上述患者的一般临床资料、实验室资料、肾脏病理资料及随访资料,并进行统计学比较。

结果1.经肾活检确诊符合入选标准的AASV伴LN患者共有29例,均为MPO-ANCA阳性。其中女性27例,男性2例,平均年龄为32.97±10.83岁。肾脏表现:25例（86.2%）有血尿,14例（48.3%）有肾病综合征,11例（37.9%）有肾功能不全,6例（20.7%）表现为急性肾损伤,5例（17.2%）表现为慢性肾衰竭;肾脏病理示8例（27.6%）达到新月体性肾炎的诊断标准,27例（93.1%）有肾间质损伤,免疫荧光均呈“满堂亮”。

肾外表现:27例（93.1%）有贫血、25例（86.2%）有补体降低、17例（58.6%）有浆膜腔积液、12例（41.4%）有关节炎、7例（24.1%）有发热。治疗及预后:6例（20.7%）行糖皮质激素冲击治疗,6例（20.7%）行糖皮质激素冲击联合其它疗法（3例联合行血浆置换）,4例（13.8%）行足量糖皮质激素联合环磷酰胺冲击治疗,2例（13.8%）行足量糖皮质激素丙种球蛋白冲击治疗。1年内肾脏存活的有23例（79.3%）,4例因肺部感染死亡（13.9%）,2例进入ESRD（6.8%）。2.AASV伴LN组与无LN的AASV组相比,出现浆膜腔积液、关节炎、肾病综合征的比例较高,入院时患有慢性肾衰竭的比例较低;实验室检查中血白细胞、血红蛋白、血小板、MPO-ANCA滴度、补体C3、C4及C反应蛋白均较低,24小时尿蛋白定量较高;肾脏病理示细胞性新月体、纤维性新月体、袢坏死、肾间质炎症细胞浸润、肾小管萎缩、肾间质纤维化、小动脉壁增厚病变比例较低;免疫荧光检查示IgG、IgA、C3、C4、C1q的荧光强度较高;AASV伴LN组部分缓解率及肾脏生存率较低。上述差异均具有统计学意义（p＜0.05）。

3. AASV伴LN组与无AASV的LN组相比,入院时患有高血压病、出现急性肾损伤的比例较高;实验室检查中血白细胞、尿红细胞计数、血肌酐、MPO-ANCA滴度、补体C3、C4均较高;肾脏组织病理示各种类型的新月体比例、肾间质炎症细胞浸润、慢性化评分均较高,出现白金耳的比例较低;免疫荧光检查示IgM、C4的荧光强度较低;AASV伴LN组行糖皮质激素冲击联合其它疗法的比例较高,缓解率及肾脏生存率较低。上述差异均具有统计学意义（p＜0.05）。

结论AASV伴LN患者与无LN的AASV的患者相比肾损害较轻,肾外器官损害较重;与无AASV的LN患者相比肾损害较重;AASV伴LN患者肾脏存活率较低。

参考文献

[1]Rapidly progressive glomerulonephritis due to systemic lupus erythematosus and ANCA-associated vasculitis overlap[J].Randa I Farah,Nisreen Abu Shahin,Mohannad Alawneh,Marwan Adwan.Lupus.2020(8)

[2]Rituximab as therapy to induce remission after relapse in ANCA-associated vasculitis.[J].Smith Rona M,Jones Rachel Bronwen,Specks Ulrich,Bond Simon,Nodale Marianna,Aljayyousi Reem,Andrews Jacqueline,Bruchfeld Annette,Camilleri Brian,Carette Simon,Cheung Chee Kay,Derebail Vimal,Doulton Tim,Forbess Lindsy,Fujimoto Shouichi,Furuta Shunsuke,Gewurz-Singer Ora,Harper Lorraine,Ito-Ihara Toshiko,Khalidi Nader,Klocke Rainer,Koening Curry,Komagata Yoshinori,Langford Carol,Lanyon Peter,Luqmani Raashid Ahmed,Makino Hirofumi,McAlear Carole,Monach Paul,Moreland Larry W,Mynard Kim,Nachman Patrick,Pagnoux Christian,Pearce Fiona,Peh Chen Au,Pusey Charles,Ranganathan Dwarakanathan,Rhee Rennie L,Spiera Robert,Sreih Antoine G,Tesar Vladimir,Walters Giles,Weisman Michael H,Wroe Caroline,Merkel Peter,Jayne David.Annals of the rheumatic diseases.2020(9)

[3]SUN-374 B-CELL DEPLETION AND RESPONSE IN A RANDOMIZED,CONTROLLED TRIAL OF OBINUTUZUMAB FOR PROLIFERATIVE LUPUS NEPHRITIS[J].B.Rovin,R.Furie,G.Aroca,J.P.Garg,A.Alvarez,H.Fragoso-Loyo,E.Zuta Santillan,P.Brunetta,T.Schindler,C.M.D.Looney,I.Hassan,M.D.Cascino,A.Malvar.Kidney International Reports.2020(3)

[4]A unique presentation of a rare disease:biopsy proven systemic lupus erythematosus and microscopic polyangitis:an overlap syndrome.[J].Meyler Diana,Arrascaeta-Llanes Abilio,Gupta Ravi,Godhwani Sanjay.Journal of community hospital internal medicine perspectives.2019(5)

[5]高稳超.ANCA相关性血管炎肾损伤伴狼疮性肾炎的临床病理特征及预后分析[D].郑州大学,2021.