定量检测肌氨酸的肌氨酸氧化酶方法

背景技术

目前用于检测肌氨酸的方法主要有液相色谱或气象色谱与质谱联用检测法、肌氨酸氧化酶荧光检测法、毛细管电泳电化学发光检测法、肌氨酸氧化酶分光光度检测法。

色谱-质谱联用检测法虽然检测灵敏度、准确度、精密度均较高，但由于色谱-质谱设备昂贵，检测成本较高，检测速度慢，很难大批量检测，且操作复杂一般人很难掌握。因此，常应用于科研，很难应用临床大样本量诊断检测。

肌氨酸氧化酶荧光检测法、毛细管电泳电化学发光检测法其检测灵敏度、准确度、精密度略低于色谱-质谱联用检测法，但也可满足临床的需求。此两种方法的检测成本较色谱-质谱联用检测法已大大降低，但在检测时仍需购置专门的检测装置，如荧光检测器、毛细光电泳仪等专门设备。并且人工操作的部分很高，对应用于常规临床检测来讲仍有一定的难度。

肌氨酸氧化酶分光光度检测法，其检测成本低、可应用于目前任何一种全自动生化分析仪，可应用于临床高速大样本量的检测需要。但由于以往的色原灵敏度低，造成该方法的灵敏度很难满足临床的需求。

检测原理

反应结束后有醌亚胺类有色物质生成造成吸光度的变化，并且该吸光度的变化与肌氨酸的浓度成正比。

反应体系中各反应物质浓度：

试剂浓度：

Rl (一试剂）：

缓冲液 50-100mmol/L 

4-氨基安替比林 2-4mmol/L

过氧化物酶 >20KU/L

R2 (二试剂）：

缓冲液50mmoI /I,

色原 3-5mmol/L

肌氨酸氧化酶 5-10KU/L

样本试剂反应体积比例：R1/R2试剂比例为3/1，样本与总体试剂量的比例为1/5 〜1/20。

缓冲液：反应体系用缓冲液可以使Tris-HCL缓冲液、磷酸盐缓冲液、N-三羟基代甲基-3-氨基丙磺酸缓冲液。缓冲液PH值调整在7. 0〜9. 0左右。5. 4色原，色原可选用目前的新型色原（N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐（TOOS)或N，N-双(4-磺丁基）-3-甲基苯胺二钠盐（TODB)或N-(2-羟基-3-磺丙基）-3’5- 二甲氧基苯胺钠盐（HDAOS))。

检测波长：不同色原所采用的检测主波长不同，副波长相同均使用700nm波长，

TOOS 550-570nm ；

TODB 530_540nm ；

HDAOS 580_590nm。

反应温度：反应温度为30〜40°C。

反应时间与吸光度监测时间：反应时间控制在8-10分钟，吸光度监测点控制在加入R2试剂后30〜66秒开始监测反应吸光度值直至反应结束。