人细胞角蛋白20(CK20)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人细胞角蛋白20(CK20)ELISA KIT是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验法检测样本中细胞角蛋白20(CK-20)的浓度。

实验原理：往预先包被人细胞角蛋白20(CK20)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人细胞角蛋白20(CK20)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人细胞角蛋白20(CK20)ELISA KIT

样本处理及要求：

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）去除颗粒。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用[4][5]

用于SATB2、CDX2、CK20、Villin在卵巢和阑尾黏液性肿瘤病理来源诊断中应用研究

研究特异AT序列结合蛋白2（Specific AT sequence binding protein 2,SATB2）和尾状同源盒2（Caudate homologous box 2,CDX2）和细胞角蛋白20（Cytokeratin 20,CK20）和绒毛蛋白（Villi protein,Villin）的免疫组化单染色以及双重染色（DS）在鉴别卵巢黏液性肿瘤与阑尾黏液性肿瘤中的应用。

研究对象中选择了43例卵巢黏液性肿瘤和11例阑尾黏液性肿瘤（包括良性、交界性、恶性黏液性肿瘤）和10例正常卵巢组织（子宫良性疾病行子宫+双侧附件切除术）进行SATB2、CDX2、CK20、Villin的免疫组化染色,并使SATB2或CDX2分别与CK20或Villin配伍双重染色。比较SATB2、CDX2、CK20、Villin单染色及SATB2或CDX2分别与CK20或Villin配伍双重染色在诊断卵巢黏液性肿瘤与阑尾黏液性肿瘤中的敏感性和特异性。

结果:SATB2、CDX2、CK20、Villin单染色及SATB2或CDX2分别与CK20或Villin配伍双重染色,在诊断卵巢黏液性肿瘤与阑尾黏液性肿瘤中,免疫组化单染色中SATB2的特异性最高为79%,而敏感性为82%;SATB2和Villin配伍双重染色的敏感性为73%,特异性提高到93%;SATB2和CK20配伍双重染色的敏感性为73%,而特异性为100%;相比之下,CDX2和CK20/Villin的配伍双重染色虽敏感性稍高（91%/82%）,但特异性较低（56%）。

结论:1.本实验验证了SATB2、CK20、CDX2、Villin免疫组化单染色及SATB2或CDX2分别与CK20或Villin配伍双重染色在卵巢黏液性肿瘤和阑尾黏液性肿瘤中的表达有明显的差异,联合SATB2、CK20、CDX2、Villin配伍双重染色检查有助于卵巢黏液性肿瘤和阑尾黏液性肿瘤的鉴别诊断。

2. SATB2/CK20配伍双重染色在鉴别卵巢黏液性肿瘤和阑尾黏液性肿瘤方面具有的临床应用价值,SATB2/CK20配伍双重染色在应用区分卵巢黏液性肿瘤和阑尾黏液性肿瘤中优于其他的配伍双重染色（CDX2/CK20、CDX2/Villin、SATB2/Villin）或SATB2、CK20、CDX2和Villin等任何免疫组化指标的单一染色。

3.更重要的是,免疫组化的双重染色可以帮助有限的组织标本完成鉴别工作。

参考文献

[1]PAX2,PAX8 and CDX2 Expression in Metastatic Mucinous,Primary Ovarian Mucinous and Seromucinous Tumors and Review of the Literature.[J].Ates Ozdemir D,Usubutun A.Pathology oncology research:POR.2016(3)

[2]Immunohistochemical characterization of appendiceal mucinous neoplasms and the value of special AT‐rich sequence‐binding protein 2 in their distinction from primary ovarian mucinous tumours[J].Sarah Strickland,Carlos Parra‐Herran.Histopathology.2016(7)

[3]Low-Stage High-Grade Serous Ovarian Carcinomas:Support for an Extraovarian Origin[J].Elizabeth Morency,Mario M.Leitao,Robert A.Soslow.International Journal of Gynecological Pathology.2016(3)

[4]SATB2 Expression Distinguishes Ovarian Metastases of Colorectal and Appendiceal Origin From Primary Ovarian Tumors of Mucinous or Endometrioid Type[J].Michelle Moh,Gregor Krings,Deniz Ates,Anil Aysal,Grace E.Kim,Joseph T.Rabban.The American Journal of Surgical Pathology.2016(3)

[5]王爱华.SATB2、CDX2、CK20、Villin在卵巢和阑尾黏液性肿瘤病理来源诊断中应用[D].青岛大学,2018.