人抗可提取核抗原抗体(ENA-AB)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人抗可提取核抗原抗体(ENA-AB)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中抗可提取核抗原抗体(ENA-AB)的含量。

实验原理：用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

人抗可提取核抗原抗体(ENA-AB)ELISA试剂盒

样本处理及要求

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

应用^[4][5]

用于系统性红斑狼疮合并肺血栓栓塞症的临床特点研究

分析系统性红斑狼疮合并肺血栓栓塞症患者的临床特点。

方法：筛选诊断为SLE合并PTE患者42例,以等距抽样的方式选择同期住院的诊断为SLE且未合并PTE的患者243例,详细记录患者的临床资料及治疗预后情况,回顾性总结分析两组的临床特点。

结果1、SLE合并PTE组42例,男性4例,女性38例,男:女为1.00:9.50,平均年龄45.52±13.25岁;SLE组243例,男性24例,女性219例,男:女为1.00:9.13,平均年龄40.53±12.96岁;SLE合并PTE组年龄明显高于SLE组（t=2.300,P=0.022）,SLE合并PTE的好发年龄为50岁-60岁;SLE患者起病年龄≥50岁时更易合并PTE;两组的民族及性别无统计学差异。

2、SLE病程在1年内更容易发生PTE（Z=-2.500,P=0.012）。

3、SLE合并PTE组疾病活动性高于SLE组（Z=-2.896,P=0.004）。

4、SLE合并PTE组入院首发症状中呼吸系统表现（呼吸困难、胸痛、咯血）阳性多于SLE组;也更易出现下肢表现（下肢肿胀、疼痛）。

5、SLE合并PTE组白细胞、中性粒细胞绝对值、尿酸、胆固醇、APTT、D-二聚体比SLE组高（Z=-2.904,P=0.004、Z=-3.805,P=0.000、Z=-2.033,P=0.042、t=2.089,P=0.042、Z=-2.201,P=0.028、Z=-3.994,P=0.000）;白蛋白比SLE组低（t=-2.168,P=0.031）;在尿常规检查中,SLE合并PTE组蛋白尿阳性的患者较SLE组多。淋巴细胞绝对值、血红蛋白、血小板、球蛋白、肌酐、肌酸激酶、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、尿红细胞、尿白细胞、尿管型无统计学意义。

6、SLE合并PTE组ESR、CRP较SLE组高（t=2.210,P=0.028、Z=-5.878,P=0.000）。

7、SLE合并PTE组IgG较SLE组低（Z=-1.990,P=0.047）,补体（C3、C4）、免疫球蛋白（IgA、IgM）、dsDNA、aCL、ANCA、ANA、可提取核抗原抗体（ENA-Ab Sm、ENA-Ab U1RNP、ENA-Ab SSA、ENA-Ab SSB、ENA-Ab JO-1、ENA-Ab Rib、ENA-Ab SCL-70）无统计学意义。

8、SLE合并PTE组肺动脉高压、肺动脉增宽、胸腔积液、心包积液、下肢血栓、感染、高血压和继发性抗磷脂综合征的发生率比SLE组高。

9、SLE患者入院前服用激素剂量对发生PTE有影响（Z=-2.138,P=0.032）。

10、SLE合并PTE组住院时间较SLE组长（Z=-3.107,P=0.002）。

11、SLE患者在不同治疗措施下发生PTE的时间无明显差异（F=1.608,P=0.216）。

12、使用Logistic回归分析发现年龄、SLEDAI评分、白细胞、CRP、APTT、D-二聚体是SLE合并PTE的危险因素。

结论1、年龄较大、病程在1年内、疾病重度活动的SLE患者易发生PTE。2、合并肺动脉增宽、肺动脉高压、胸腔积液、心包积液、下肢血栓、高血压、感染、继发性抗磷脂综合征的SLE患者易发生PTE。3、年龄、SLEDAI评分、白细胞、CRP、APTT、D-二聚体为SLE患者发生PTE的危险因素。

参考文献

[1]Correlation between active disease and hypercoagulability state in patients with systemic lupus erythematosus[J].Karine Silvestre Ferreira,Walter Batista Cicarini,Luan Carlos Vieira Alves,Cristina de Mello Gomide Loures,Fernanda Magalh?es Freire Campos,Luara Isabela dos Santos,Marcos Vinícius Ferreira da Silva,Tania Mara Dabés Guimar?es,Vicente de Paulo Coelho Peixoto de Toledo,Edna Afonso Reis,Claudia Lopes Santoro Neiva,Renato Vargas Consoli,Paulo Madureira de Pádua,Maria das Gra?as Carvalho.Clinica Chimica Acta.2019

[2]Pulmonary manifestations in late versus early systemic lupus erythematosus:A systematic review and meta-analysis[J].Jennifer L.Medlin,Karen E.Hansen,Sara S.McCoy,Christie M.Bartels.Seminars in Arthritis and Rheumatism.2018

[3]Epidemiology of venous thromboembolism in the Framingham Heart Study[J].Marja K.Puurunen,Philimon N.Gona,Martin G.Larson,Joanne M.Murabito,Jared W.Magnani,Christopher J.O’Donnell.Thrombosis Research.2016

[4]Trends in the Management and Outcomes of Acute Pulmonary Embolism[J].David Jiménez,Javier de Miguel-Díez,Ricardo Guijarro,Javier Trujillo-Santos,Remedios Otero,Raquel Barba,Alfonso Muriel,Guy Meyer,Roger D.Yusen,Manuel Monreal.Journal of the American College of Cardiology.2016(2)

[5]景宇佳.系统性红斑狼疮合并肺血栓栓塞症的临床特点[D].宁夏医科大学,2020.