人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA 试剂盒的应用

背景^[1-3]

人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA试剂盒用于测定血清，血浆及相关液体样本中胃蛋白酶原A(PG-A)的含量。

人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（elisa）的原理。往预先包被人胃蛋白酶原A(PG-A)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胃蛋白酶原A(PG-A)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA试剂盒

标本要求

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于血清胃蛋白酶原、胃泌素-17及幽门螺杆菌感染在反流性食管炎中的意义研究

探究血清胃蛋白酶原、胃泌素及幽门螺杆菌感染在反流性食管炎中的意义,以期能够为临床工作中反流性食管炎的诊治和有效预防提供帮助,也为今后的相关研究提供科学依据。

方法：选择经内镜检查诊断RE的患者60例,选择镜下无器质性病变但是存在反流症状（Gerd Q评分≥8）的NERD患者42例,并选取同时期无反流症状且经内镜检查无异常的40例健康体检者作为对照组,各组间年龄及性别组成无差异。所有入选研究对象均完善内镜检查、血清胃功能三项（包含PG I、PG II、PGR、G-17）测定和C14呼气试验。

比较RE组、NERD组及对照组间的PG I、PG II、PGR、G-17水平及HP感染情况;将RE组患者按照洛杉矶分级法进行分级:LA-A级26例,LA-B级23例,LA-C/D级11例,比较不同分级的RE患者间的PG I、PG II、PGR、G-17水平及HP感染情况;将所有研究对象按照HP阳性或HP阴性进行分组:HP阳性组61例,HP阴性组81例,比较两组间PG I、PG II、PGR、G-17水平;应用SPSS 23.0统计软件,定性资料以百分数（N%）表示,采用卡方检验比较;定量资料以均数±标准差表示（x±S）,多组间定量资料比较采用方差分析,多组间的两两比较使用LSD法;两组间定量指标间比较采用两独立样本t检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。

结果（1）G-17水平:RE组（4.82±5.844）,NERD组（5.98±7.031）,对照组（4.58±3.644）,三组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;

（2）PG I水平:RE组（108.75±59.118）,NERD组（107.12±42.898）,对照组（134.96±71.759）,三组间两两比较发现,PG I在RE组和NERD组中均降低,且差异均具有统计学意义（P<0.05）;

（3）PG II水平:RE组（7.55±7.173）,NERD组（6.98±3.254）,对照组（9.88±5.626）,分析发现NERD组PG II水平低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;

（4）PGR值:RE组（18.36±10.645）,NERD组（16.69±5.743）,对照组（13.98±3.491）,PGR在三组间存在差异,且差异具有统计学意义（P<0.05）,三组间两两比较,RE组PGR高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）;

（5）HP阳性率:RE组41.7%、NERD组40.5%、对照组47.5%,三组间HP阳性率比较,差异无统计学意义（P>0.05）；

（6）不同分级的RE患者间比较各个指标总体比较差异均无统计学意义,两两比较后发现LA-A级患者PG II水平高于和LA-B级,差异具有统计学意义（P<0.05）;

（7）HP阳性或阴性时G-17、PG I、PG II等指标间存在差异,且差异具有统计学意义（P<0.05）。

参考文献

[1]Association between Lifestyle and Gastroesophageal Reflux Disease Questionnaire Scores:A Cross-Sectional Study of 37 442 Chinese Adults.[J].Gong Yan,Zeng Qiang,Yan Yi,Han Chaojing,Zheng Yansong.Gastroenterology research and practice.2019

[2]Indian consensus on gastroesophageal reflux disease in adults:A position statement of the Indian Society of Gastroenterology.[J].Bhatia Shobna J,Makharia Govind K,Abraham Philip,Bhat Naresh,Kumar Ajay,Reddy D Nageshwar,Ghoshal Uday C,Ahuja Vineet,Rao G Venkat,Devadas Krishnadas,Dutta Amit K,Jain Abhinav,Kedia Saurabh,Dama Rohit,Kalapala Rakesh,Alvares Jose Filipe,Dadhich Sunil,Dixit Vinod Kumar,Goenka Mahesh Kumar,Goswami B D,Issar Sanjeev K,Leelakrishnan Venkatakrishnan,Mallath Mohandas K,Mathew Philip,Mathew Praveen,Nandwani Subhashchandra,Pai Cannanore Ganesh,Peter Lorance,Prasad A V Siva,Singh Devinder,Sodhi Jaswinder Singh,Sud Randhir,Venkataraman Jayanthi,Midha Vandana,Bapaye Amol,Dutta Usha,Jain Ajay K,Kochhar Rakesh,Puri Amarender S,Singh Shivram Prasad,Shimpi Lalit,Sood Ajit,Wadhwa Rajkumar T.Indian journal of gastroenterology:official journal of the Indian Society of Gastroenterology.2019(5)

[3]Association between Helicobacter pylori infection,eradication and diabetes mellitus.[J].Kato Masayuki,Toda Akiko,Yamamoto-Honda Ritsuko,Arase Yasuji,Sone Hirohito.Journal of diabetes investigation.2019(5)

[4]Only serum pepsinogen I and pepsinogen I/II ratio are specific and sensitive biomarkers for screening of gastric cancer.[J].Mansour-Ghanaei Fariborz,Joukar Farahnaz,Baghaee Massood,Sepehrimanesh Masood,Hojati Amineh.Biomolecular concepts.2019(1)

[5]张茜茜.血清胃蛋白酶原、胃泌素-17及幽门螺杆菌感染在反流性食管炎中的意义[D].内蒙古医科大学,2020.