人2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA KIT用于测定人血清，血浆及相关液体样本中2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)的含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)水平。用纯化的人2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)，再与HRP标记的2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)浓度。

人2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA KIT

样本处理及要求：

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于丙戊酸钠对50%TBSAⅢ°烧伤犬休克期血液动力学指标、脏器功能和存活率的影响研究

1. 观察丙戊酸钠（VPA）静脉给药能否改善犬致死性烧伤休克期存活率和脏器功能指标；2.研究VPA对血液动力学、组织灌流、血管通透性和氧动力学指标的影响及其与促炎因子和2,3-二磷酸甘油酸水平的关系。

2. 方法：成年雄性Beagle犬40只,体重10～14kg,先期无菌手术行动、静脉和肠内置管术,监测血流动力学指标和肠粘膜血流量（IMBF）。24h后用丙泊酚作15分钟短时麻醉,凝固汽油燃烧颈后、背、臀部30s和胸腹部15s,造成50%TBSAⅢ°烧伤。动物随机分为①不补液组；②2-甲基-2-戊烯酸（2M2P,与VPA结构类似,作为VPA的对照药）组；③丙戊酸钠（VPA）组和④静脉补液组,每组10只。不补液组伤后0.5h仅静注20ml生理盐水,VPA和2M2P组于烧伤后0.5h分别静脉注入VPA和2M2P（剂量为100mg／kg,溶于20ml生理盐水中）；静脉补液组于伤后0.5h静脉输入20ml生理盐水+乳酸林格氏（LR）液,LR补液量和速率依据Parkland公式给予。

24h后各组均实施延迟静脉补液,伤后72h结束实验。在动物清醒状态下观察或检测伤前（0h）和伤后2h、4h、8h、24h、48h、72h血流动力学、肠粘膜血流量、血气、脏器功能指标以及血浆TNF-α、2,3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）水平。伤后72h或动物濒死前取心、肺、肝、肾和空肠组织测定一氧化氮合酶（NOS）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、黄嘌呤氧化酶（XOD）和丙二醛（MDA）水平,并统计伤后72h死亡率。

结果：伤后4组犬平均动脉压（MAP）和心排指数（CI）均显著降低；VPA组MAP和CI伤后4h起各时相点均显著高于不补液组和2M2P组（P<0.05或P<0.01）,24h内与静脉补液组无显著差异,但24h后逐渐低于静脉补液组（P<0.05）；不补液组和2M2P组伤后进行性降低,组间比较无显著差异。伤后4组外周血管阻力指数（SVRI）升高、左室压变化速率（dp／dtmax）降低,VPA组SVRI伤后2h显著高于其它三组（P<0.01）,8h起各时间点低于不补液组和2M2P组（P<0.05或P<0.01）。VPA组dp／dtmax伤后各时间点显著高于不补液组和2M2P组（P<0.05或P<0.01）,24h后显著低于静脉补液组（P<0.01）。

伤后各时间点VPA组和静脉补液组PV和IMBF高于不补液组和2M2P组（P<0.05或P<0.01）。VPA组血浆ALT和CK-MB低于不补液组和2M2P组（P<0.05）。72h死亡率比较：静脉补液组（0%）<VPA组（40%）<2M2P组（70%）<不补液组（90%）,P均<0.01。VPA组血浆TNF-a、NOS、iNOS、XOD和MDA等炎症因子水平以及脏器组织含水量均低于不补液组和2M2P组（P<0.05或P<0.01）；而VPA组2,3-DPG水平高于其它3组（P<0.05或P<0.01）。

参考文献

[1]Surviving blood loss without blood transfusion in a swine poly-trauma model[J].Hasan B.Alam,Fahad Shuja,Muhammad U.Butt,Michael Duggan,Yongqing Li,Nikolaos Zacharias,Eugene Y.Fukudome,Baoling Liu,Marc deMoya,George C.Velmahos.Surgery.2009(2)

[2]Cell protective mechanism of valproic acid in lethal hemorrhagic shock[J].Yongqing Li,Baoling Liu,Elizabeth A.Sailhamer,Zengqiang Yuan,Christian Shults,George C.Velmahos,Marc deMoya,Fahad Shuja,Muhammad U.Butt,Hasan B.Alam.Surgery.2008(2)

[3]Edaravone improves the survival of rats subjected to hemorrhagic shock without resuscitation[J].Yoshitaka Uji,Hiroshi Yamamoto,Tsuyoshi Mori,Hiroya Akabori,Hiroshi Tsuchihashi,Tomoharu Shimizu,Yoshihiro Endo,Tohru Tani.Surgery Today.2008(5)

[4]HYPERTONIC SALINE MODULATION OF INTESTINAL TISSUE STRESS AND FLUID BALANCE[J].Charles S.Cox,Ravi Radhakrishnan,Lindsey Villarrubia,Hasen Xue,Karen Uray,Brijesh S.Gill,Randolph H.Stewart,Glen A.Laine.Shock.2008(5)

[5]侯经元.丙戊酸钠对50%TBSAⅢ°烧伤犬休克期血液动力学指标、脏器功能和存活率的影响[D].中国人民解放军军医进修学院,2010.