大鼠载脂蛋白C3(APO-C3)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠载脂蛋白C3(APO-C3)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法检测样品中人载脂蛋白C3(APO C3)的水平。

实验原理：往预先包被人载脂蛋白C3(Apo-C3)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人载脂蛋白C3(Apo-C3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

大鼠载脂蛋白C3(APO-C3)ELISA试剂盒

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于刺络泻血对高脂血症模型大鼠ApoC3及LPL的影响研究

采用高脂饲料投喂法建立高脂血症大鼠模型,从载脂蛋白C3及脂蛋白脂肪酶两个方面,对刺络泻血千预高脂血症大鼠的降脂效果进行评估,并对其干预高脂血症的作用机制进行探讨。

方法1.实验分组:将32只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、刺络泻血组、阳性药物组4组。各组大鼠均在实验前适应性饲养1周。

2. 造模方法:在本研究中,采用国内普遍使用的高脂饲料投喂法造模。具体方法:将雄性SD大鼠以高脂词料喂养造模,高脂饲料的配方为:82.89%基础饲料、1%胆固醇、10%猪油、0.2%丙基硫氧嘧啶,5%蛋黄粉和1%%胆酸钠,造模持续28天。

3. 干预方法:（1）空白对照组:常规饲养8周,不做任何处理,从第5周开始,去离子水灌胃,仅抓取、按压,每周2次;（2）模型对照组:高脂词料喂养8周,从第5周开始,去离子水灌胃,仅抓取、按压,每周2次;（3）刺络泻血组:高脂词料喂养8周,从第5周开始,去离子水灌胃,丰隆,足三里刺络泻血,出血量为0.3ml-0.5ml（换算公式为出血量=体质量*7.4%*2%）,每周2次;（4）阳性药物组:高脂饲料喂养8周,从第5周后开始,按照1.8mg/（kg*d）立普妥灌胃,每周2次。

4. 指标检测及方法:采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清中血脂四项、ApoC3的含量及LPL的活性。

结果1.各组大鼠血脂四项的变化实验结束后,与正常对照组相比,模型对照组TC、LDL含量均显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组相比,刺络泻血组与阳性药物组TC、LDL含量显著降低,差异均有统计学意义（P<0.05）;刺络泻血组与阳性药物组比较,血脂四项含量无显著差异（P>0.05）。

2. 各组大鼠ApoC3的含量及LPL的活性变化（1）ApoC3的含量变化:与正常对照组相比,模型对照组ApoC3含量显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组相比,刺络泻血组与阳性药物组ApoC3含量显著降低,差异均有统计学意义（P<0.05）;刺络泻血组与阳性药物组比较,ApoC3含量无显著差异（P>0.05）。（2）LPL活性的变化:与正常对照组相比,模型对照组LPL活性无显著差异（P>0.05）;与模型组相比,刺络泻血组与阳性药物组LPL活性物显著差异（P>0.05）;刺络泻血组与阳性药物组比较,LPL活性无显著差异（P>0.05）;各组间均无显著差异。

结论1、大鼠“丰隆穴”、“足三里穴”刺络泻血,能够有效降低血清中TC、TG、LDL-C含量,升高HDL-C含量,稳定血脂水平。

2、大鼠“丰隆穴”、“足三里穴”刺络泻血,能降低血清ApoC3的含量、不影响LPL的活性。

参考文献

[1]Mulberry Leaf Extracts prevent obesity-induced NAFLD with regulating adipocytokines,inflammation and oxidative stress[J].Chiung-Huei Peng,Huei-Ting Lin,Dai-Jung Chung,Chien-Ning Huang,Chau-Jong Wang.Journal of Food and Drug Analysis.2018(2)

[2]Low‐density lipoprotein‐cholesterol lowering in individuals at intermediate cardiovascular risk:Percent reduction or target level?[J].Fernando H.Y.Cesena,Antonio Gabriele Laurinavicius,Viviane A.Valente,Raquel D.Concei??o,Raul D.Santos,Marcio S.Bittencourt.Clinical Cardiology.2018(3)

[3]The role of plasma lipoprotein lipase,hepatic lipase and GPIHBP1 in the metabolism of remnant lipoproteins and small dense LDL in patients with coronary artery disease[J].Yuji Muraba,Takafumi Koga,Yohnosuke Shimomura,Yasuki Ito,Yuko Hirao,Junji Kobayashi,Takao Kimura,Katsuyuki Nakajima,Masami Murakami.Clinica Chimica Acta.2018

[4]Combination of berberine and evodiamine inhibits intestinal cholesterol absorption in high fat diet induced hyperlipidemic rats[J].Xin Zhou,Fengying Ren,Hong Wei,Liyun Liu,Tao Shen,Shijun Xu,Jiangping Wei,Jiayue Ren,Hengfan Ni.Lipids in Health and Disease.2017(1)

[5]张博.刺络泻血对高脂血症模型大鼠ApoC3及LPL的影响[D].北京中医药大学,2018.