Recombinant Rat HB-EGF对小鼠实验性肝纤维化的影响

背景^[1]

肝素结合性表皮生长因子（ heparin－ binding epidermal growth factor like growth factor，HB－EGF）是EGF家族的成员之一，为新型强力丝裂原HB－EGF在肺、心脏、骨骼肌等组织均有表达，其在肝脏含量极低，在多种刺激因素作用下其合成增多。Recombinant Rat HB-EGF与表皮生长因子受（ epidermal growth factor receptor， EGFR／ErbBl）和ErbB4结合，激活下游信号通路，促进细胞增殖，抑制细胞凋亡，促进ECM合成。

Recombinant Rat HB-EGF参与组织损伤的早期修复反应，与多种器官纤维化密切相关。研究发现对胰腺纤维化及心脏纤维化均有促进作用。研究团队发现，活化的HSCs中HB－EGF及其受体高表达，HB－EGF刺激后HSCs增殖增加，HSCs凋亡减少。这些研究提示HB－EGF有促纤维化作用。与此矛盾的是，四氯化碳（ carbon tetrachloride，CCL₄）、N－亚硝基二甲胺（N－ Nitrosodimethylamine，DMN）诱导HB－EGF基因敲除小鼠肝纤维化加重。可见，HB－EGF在肝纤维化中的作用尚不完全明确。

Recombinant Rat HB-EGF对小鼠实验性肝纤维化的影响^[1]

目的：检测四氯化碳和胆总管结扎诱导HB－BEG转基因小鼠肝纤维化程度，旨在探讨Recombinant Rat HB-EGF对肝纤维化形成的作用。

方法：选择过表达HB－EGF转基因（ transgenic，Tg）和同周龄、同性别、同窝、非Tg野生型（ wild type，WT）小鼠为研究对象，采用腹腔注射四氯化碳（ carbon tetrachloride，CCl₄）和胆总管结扎（ bile duct ligation，BDL）方法建立2种小鼠肝纤维化模型。CCl₄模型分为：WT对照组、Tg对照组、WT模型组、Tg模型组，各组动物于最后1次注射CCl₄后48小时麻醉处死留取肝脏标本。

BDL模型分为：WT假手术、Tg假手术组、WT模型组、Tg模型组。整个造模过程中，所有小鼠所有小鼠手术后2周取材。采用苏木精－伊红（ hematoxylin and eosin，H＆E）染色观察小鼠肝脏形态学变化，应用天狼星红染色测定胶原纤维在肝脏内的沉积情况，碱水解法检测肝组织中羟脯氨酸的变化，免疫组织化学染色测定肝组织中HB－EGF、α－SMA蛋白表达变化， Western blot和 Real time PCR法测定HB－EGF、α－SMA、I型胶原、TIMP－1、MMP－13蛋白和基因的表达，明胶酶谱法测定MMP－13蛋白。

结果：

I 、Real time PCR、 western bloti和免疫组化染色结果证实HB－EGF在HB－ EGF Tg小鼠肝脏被中被成功过表达

2、H＆E及天狼星红染色结果显示HB－EGF增加CCl和BDL小鼠肝纤维化程度。3过表达HB－EGF促使ECM在肝脏内过度沉积。在CC4和BDL诱导的

肝纤维化模型，HB－ EGF Tgi模型组天狼星红染色面积明显高于WT模型组。

3、过表达HB－EGF增加了肝脏羟氨酸的含量。在两种肝纤维化模型中，与WT模型组比较，HB－ EGF Tg模型组肝组织羟氨酸含量明显增加。

5、HB－EGF诱导肝脏1型胶原合成增加。 Westem blot和 Real time PCR检测结果显示，两种肝纤维化模型小鼠肝组织I型胶原含量在Tg模型组明显高于WT模型组。

参考文献

[1]转基因小鼠表达肝素结合性表皮生长因子在肝纤维化中的作用及机制.郭永泽