伊马替尼杂质F的高灵敏度分析方法

概述^[1]

伊马替尼杂质F中文别名：伊马替尼(吡啶)-N-氧化物，英文别名CGP 72383；伊马替尼杂质F存在于甲磺酸伊马替尼片的生产过程，甲磺酸伊马替尼片中杂质F的测定液相色谱质谱法。甲磺酸伊马替尼片；化学名称；4-[(4-甲基-1-哌嗪)甲基]-N-[4-甲基-3-[[4-3-吡啶-2-嘧啶]氨基]苯基] -苯胺甲磺酸盐，适应症为治疗费城染色体阳性的慢性髓性白血病(Ph+CML)的慢性期，加速期或急变期，用于治疗不能切除或发生转移的恶性胃肠道间质肿瘤(GIST)的成人患者，在该药合成过程中，会产生基因杂质F，按照EP规定采用LCMS对某制药公司提供的样品进行了分析测定，对相关药物分析研发人员有一定的参考意义，利用液相色谱质谱仪检测甲磺酸伊马替尼片中杂质F的含量，分析与验证该方法的可行性，使其达到药典规定的要求。两者结构式如下：

高灵敏度分析方法^[1]

针对伊马替尼杂质F，开发一种分析方法，采用高效液相色谱-质谱联合使用的方法，用有机溶剂和水的混合相溶解样品，然后再以乙腈和pH=3.5的甲酸铵作为流动相，在十八烷基键合硅胶色谱柱上进行梯度洗脱，这个方法简单有效地解决了杂质F检测灵敏度不高，专属性不强，更高效的分离并检测出伊马替尼杂质F。

本技术的具体方案如下所示：

（1）采用高效液相色谱-质谱法连用，以0.01%-0.05%甲酸乙腈溶液和甲酸铵缓冲液作为流动相，在十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱上进行梯度洗脱。

（2）溶解样品所用的稀释液，乙腈和水的比例是20:80；

（3）所选用的甲酸铵缓冲盐的pH值为3-4，优选的pH值为3.4-3.5；

（4）甲酸铵的浓度范围为0.6g/l-1.2g/l；

（5）色谱的检测条件为：流动相洗脱速率为0.8-1.2ml/min;色谱柱的温度为30℃-40℃；

（6）样品进样量为10ul。

本分析方法的效果和优点是：

（1）可以非常有效地分离出甲磺酸伊马替尼与伊马替尼杂质F，空白稀释液不会干扰杂质F的检测，该分析方法专属性很强，而且比较快速；

（2）该分析方法相对而言操作比较简单；

（3）该分析方法能够对甲磺酸伊马替尼与伊马替尼杂质F进行定量，而且还具有很高的灵敏度，检测限位0.02ppm、定量限位0.05ppm。

伊马替尼杂质F欧洲药典要求^[1]

化合物N-（5-氨基-2-甲基苯基）-4-（3-吡啶基）-2-嘧啶胺是合成甲磺酸伊马替尼的中间体，属于潜在的基因毒性杂质。在欧洲药典（EP8.4）甲磺酸伊马替尼原料药质量标准中，将化合物N-（5-氨基-2-甲基苯基）-4-（3-吡啶基）-2-嘧啶胺命名为伊马替尼杂质F，并且规定其限度不得超过20ppm，并公开了用高效液相色谱-质谱联用的检测伊马替尼杂质F的方法，按照欧洲药典（EP8.4）的公开的实验条件，来配制不同浓度的伊马替尼杂质F的对照品，检测限以S/N≥3计，定量限以S/N≥10计，确定该方法伊马替尼杂质F的检测限为0.1ppm、定量限为0.25ppm。

LC-MS测定甲磺酸伊马替尼中基因毒性杂质的含量^[2]

建立LC-MS法来测定甲磺酸伊马替尼中基因毒性杂质的含量。其具体的实验方法为：采用Inertsil ODS-3 C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相A为10 mmol.L-1甲酸铵溶液（用甲酸调pH至3.2）,流动相B为甲醇,然后再梯度洗脱（0～10 min,45%B;10～17 min,45%→80%B;17～22 min,80%B;22～23 min,80%→45%B;23～33 min,45%B）;流速为1.0 mL.min-1;柱温为35℃;采用正离子模式采集数据。结果：杂质507-00进样是在0.018～0.734 ng范围内,与峰面积呈良好线性关系,线性方程为Y=8.909×104X-453.2,r=0.9999;检测限0.007 ng;定量限为0.018 ng;平均回收率为90.9%,RSD为3.6%（n=9）。最终结论为本方法简便准确,可用于甲磺酸伊马替尼中基因毒性杂质的检测。

参考文献

[1]江苏豪森药业集团有限公司.伊马替尼基因杂质的高灵敏度分析方法:中国,CN201610139151.4[P].2016-07-20.

[2] 刘俊华, 钟雅妮, 熊渊, et al. LC-MS测定甲磺酸伊马替尼中基因毒性杂质的含量[J]. 药物分析杂志, 2013(7):1168-1170.