磷酸西他列汀的制备

背景及概述^[1]

磷酸西他列汀( sitagliptin phosphate，1) 是一种新型抗 2 型糖尿病药物，由默沙东公司研制开发，于2006 年 10 月经美国 FDA 批准上市，是第 1 个用于治疗 2 型糖尿病的二肽基肽酶 Ⅳ ( DPP-4) 抑制剂类药物。磷酸西他列汀治疗 2 型糖尿病效果十分理想。作为一种新型抗糖尿病药物，磷酸西他列汀具有血糖依赖性，降糖作用适中，在增加胰岛素分泌的同时不会发生低血糖，有效减轻饥饿感等优势，且无恶心呕吐、水肿及增加体质量等副作用。

制备^[1]

目前已报道的合成磷酸西他列汀的方法较多，概括起来主要有以下 2 种合成策略: 一是(R) -3-(叔丁氧羰基氨基) -4-( 2，4，5-三氟苯基)丁酸(8) 和 1，2，4-三唑并吡嗪(9)缩合，脱保护来制备磷酸西他列汀；另一种是二酮化合物 2 与 1，2，4-三唑并吡嗪(9) 缩合，经烯氨化、不对称催化氢化制备磷酸西他列汀， 最近默沙东公司报道了二酮化合物(2) 与 1，2，4-三唑并吡嗪(9) 的缩合物通过生物转氨酶反应一步合成磷酸西他列汀。

上述制备方法不同程度地存在原料成本高、反应操作复杂、使用贵金属催化剂、反应时间长等缺陷。

吕承林等设计了一条新的合成路线：以 2，4，5-三氟苯乙酸为原料，与 2，2-二甲基-1，3-二噁烷-4，6-二酮缩合得到二酮化合物2，2在甲醇中加热脱羧得到-酮酯(3)，3 与 (S) -苯甘酰胺反应得到手性烯胺(4)，4 经硼烷/L-二苯基脯氨醇(CBS催化剂)不对称还原得到一对非对映异构体 5a 和 5b，其中，5a 经切除手性辅助基、Boc 保护氨基、水解共 7 步反应得到关键中间体(R) -3-( 叔丁氧羰基氨基)-4-(2，4，5-三氟苯基)丁酸(8) ，8 在 EDC 作用下与1，2，4-三唑并吡嗪缩合、 脱除 Boc 保护基制得目标产物 1，总收率为33% ，整个合成路线如图 1 所示。

质量控制^[2]

1 色谱条件的筛选

经查阅欧洲药典及美国药典得到磷酸西他列汀含量测定的色谱条件为：流动相乙腈-1.36 g/L 磷酸二氢钾-磷酸缓冲液（磷酸调 pH 为2.0）（ 15∶85），流速 1.0 mL/min，柱温 30 ℃，检测波长为 205 nm。考虑到此流动相其盐溶液部分pH 为 2.0 过酸，可能会对色谱柱损害，故不予考虑。查阅相关文献得磷酸西他列汀含量测定的色谱条件为：甲醇-0.1%高氯酸 (32∶68)，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃，检测波长 268 nm。

将磷酸西他列汀对照品在上述色谱条件下进行进样分析，其主峰保留时间约 30 min，保留时间过长，多次更改甲醇-0.1%高氯酸比例及流速调整主峰保留时间，考察柱温对色谱峰的影响，同时将磷酸西他列汀对照品按照紫外分光光度法在 200~350 nm 波长范围内进行全波长扫描，确定其吸收波长。最终得到磷酸西他列汀含量测定的色谱条件为：流动相甲醇-0.1%高氯酸（45∶55），流速 0.8 mL/min，柱温为 25 ℃，检测波长为205nm。

2 供试品溶液的制备方法

试验中调整甲醇-0.1%高氯酸比例制备供试品溶液，按照上述色谱条件于 0、 4、8、12 和 24 h 进样，观察其主峰峰面积变化，考察其稳定性，发现磷酸西他列汀在甲醇-0.1%高氯酸任何比例的溶液中都较稳定，其RSD值均小于 2.0 %，且进样分析时色谱峰峰形好。为方便实验操作，故采用流动相作为磷酸西他列汀稀释液溶解药品。

3 溶出方法的选择

 经查阅欧洲药典得磷酸西他列汀片的溶出方法为：转速 50 r/min，溶出介质0.01 mol/L HCl(1000 mL)，溶出时间 30 min。查阅其他相关资料得磷酸西他列汀片的溶出方法为：转篮法，转速100 r/min，溶出介质水(900 mL)，溶出时间30 min。为了更好地考察磷酸西他列汀在不同 pH条件下的溶出行为，采用水、 0.01 mol/L HCl、PBS4.5及PBS6.8 作为 4 种溶出介质；考虑到人体胃肠道的生理环境及蠕动速度，拟定转速为50 r/min。最终得到磷酸西他列汀片的溶出方法为：浆法，转速 50 r/min，溶出介质水、0.01 mol/L HCl、 PBS4.5 及PBS6.8（1000 mL），溶出时间60 min。

4 溶出样品溶液的配制

为使试验操作简便易行，试验中采用紫外分光光度法进行溶出样品溶液的测定。由于采用紫外分光光度法测定样品溶液的吸光度时，以样品溶液的吸光度度数在 0.3~0.7之间为宜，试验中通过确定将溶出样品溶液的浓度稀释 5 倍，使其吸光度度数在 0.3~0.7 之间。

主要参考资料

 [1]吕承林,沈方亮,孙鑫哲,张兴贤.2型糖尿病药物磷酸西他列汀的合成[J].中国新药杂志,2014,23(13):1574-1578.

[2]张金芬,周禹宏,李继彬,邢正英,房志仲.磷酸西他列汀片的质量控制[J].天津医科大学学报,2018,24(01):73-77.

[3] 吕飞,欧阳雪宇,李瑞丰,赵静雪,魏永燕.涉及西他列汀的中国专利申请分析与预警[J].中国医药生物技术,2015,10(03):280-285.