石榴皮鞣素的药理作用及应用

背景及概述^[1][2]

石榴皮是石榴科植物石榴Punica granatum L．的干燥果皮，为我国传统中药材，具有涩肠止泻、止血、驱虫的功效，可以用于治疗久泻、久痢、便血、脱肛、崩漏、带下、虫积腹痛等疾病。石榴皮中富含单宁( tannins) 类物质，这些活性物质单体如安石榴苷(punicalagin)、石榴皮鞣素( punicalin)、鞣花酸(ellagic acid)等强抗氧化性使之具备抗癌、抗肿瘤、抗菌、抗病毒等药用活性。石榴皮鞣素是一种可水解的单宁，可从石榴皮、石榴叶、石榴果汁等部位中分离得到，为石榴皮中较为特异性的成分。目前国内外学者对于安石榴苷、鞣花酸的分离、纯化、生物活性及毒理性方面研究比较系统，而石榴皮鞣素由于其含量很低(约2%)，仅为安石榴苷的1 /20 ～ 1 /10、分离纯化难度大、成本高，导致其价格昂贵，进而限制了其药理活性研究和应用开发进程。

结构^[1]

1977 年首次从石榴皮中发现了石榴皮鞣素并对其结构进行了鉴定。用光谱学的方法确定了石榴树皮中石榴皮鞣素和安石榴苷的结构式，并分离出了2-O-没食子酸酰基石榴皮鞣素(2-O-galloyl-4，6-( S，S)-gallagyl-D-glucose)。

制备^[1][3]

目前关于石榴皮鞣素的提取大多以回流提取法为主，在回流提取中温度是关键因素之一，其能通过影响分子的运动速度而影响提取时间进而决定提取效率；而石榴皮鞣素耐热性很差，高温易造成分解或氧化反应，且由于石榴皮鞣素在石榴皮中含量很低，单纯的有机溶剂回流提取无法增加石榴皮鞣素的产量，所以回流提取法具有一定的局限性。

目前石榴皮鞣素的分离纯化主要依赖于多级柱色谱分离，包括XAD-16 离子交换树脂，凝胶Toyoperl HW-40 色谱、LH-20 色谱、DiaionHP-20、ＲP-18 等。但这些方法存在耗时、耗力、浪费溶剂等缺点。近年来随着分离技术的不断发展和成熟，出现了一些新的分离纯化方法，如中压制备色谱(MPLC)、高效逆流色谱(HSCCC)、制备型高效液相色(Preparative-HPLC) 等，这些新方法的建立极大提高了安榴林的分离效率。

1）用硫酸水溶液作溶剂对石榴皮粉中石榴皮鞣素进行提取，通过正交试验考察了4 个因素对石榴皮鞣素产率的影响，结果表明影响酸水解法提取石榴皮鞣素产率的影响因素从大到小顺序依次为：水解温度＞ 硫酸浓度＞ 水解时间＞ 液料比，最终确定了石榴皮鞣素提取的工艺为硫酸浓度3%、料液比12 ∶ 1、提取温度100℃、浸提5 h，石榴皮鞣素的产率高达8.91%。

2）对石榴皮用含水丙酮室温组织破碎进行提取，提取液减压干燥得总提取物，然后过DianionHP-20 柱，取水洗脱物以水溶解，反复经Toyopearl HW-40(C级和F 级)和MCI Gel CHP-20 柱，依次以水、不同比例的甲醇和丙酮洗脱，分离得石榴皮鞣素、安石榴苷、石榴皮亭B 和逆没食子酸。

3）用乙酸乙酯对石榴皮丙酮(61.2% )粗体物进行反复萃取得到乙酸乙酯萃取物(EPE)，然后联合使用Toyopearl HW-40(F) 柱和Sephadx LH-20 柱对EPE 进行多级分离鉴定得到石榴皮鞣素。

药理作用及应用^[1]

近年来国内外对石榴皮鞣素的研究主要集中在石榴皮鞣素的活性上，并逐步发现石榴皮鞣素具有较强的抗氧化、抗肝损伤、抗菌、抗病毒、抗炎等药理活性。

1.抗氧化、抗肝损伤

通过DPPH 清除能力、羟基自由基清除能力和总还原力测定这两个体系对石榴皮鞣素、安石榴苷以及鞣花酸的抗氧化活性进行了评价，研究结果显示在相同浓度下安石榴苷的DPPH 清除能力和还原力均大于石榴皮鞣素；高浓度时石榴皮鞣素自由基清除能力与安石榴苷相当；由于安石榴苷的苯环和酚羟基较多，结构稳定具有较强的自由基清除能力，而石榴皮鞣素比安石榴苷少一个HHDP，因此石榴皮鞣素总的抗氧化活力弱于安石榴苷。实验表明安石榴苷和石榴皮鞣素这两种鞣花单宁具有较强的抗氧化保护作用，小剂量使用即可起到护肝作用，但若大剂量使用会引起毒性反应。安石榴苷和石榴皮鞣素体外抗脂质过氧化作用呈剂量依赖性，而在体内作用时剂量依赖关系不明显；两化合物维持在小剂量时对乙酰氨基酚引起的肝损伤具有很好的保护作用，而在大剂量时保肝功效下降。

2.抗菌、抗病毒和抗炎作用

研究不同的石榴单宁对人类肠道菌的抑制作用。实验发现安石榴苷和鞣花酸对肠道的生长有较强的抑制作用，但是石榴皮鞣素对大部分肠道菌没有抑制作用，甚至有轻微的生长促进作用。石榴皮鞣素、石榴可太因不需要协助就能对淋巴细胞H9 内HIV-1 逆转录病毒具有较好的抑制作用。从Terminaliatriflora 中发现了石榴皮鞣素的单体并将其纯化出来，研究表明其能通过削减HIV-1 逆转录病毒酶活性从而影响HIV 病毒的繁殖，对HIV-1 逆转录酶的IC50是0.11 μg/ml。安石榴苷、石榴皮鞣素、鞣花酸等3 种水解单宁能抑制HBV 病毒DNA 的复制，从而对HBV 病毒产生较强的抑制作用；

研究结果表明，这3 种单宁通过抑制HBV 病毒cccDNA 的形成和促进cccDNA 的衰变等双重机制抑制乙肝病毒DNA 的复制，为筛选开发成新的治疗乙肝病毒感染的化合物提供了参考依据。石榴皮鞣素和安石榴苷对由卡拉胶引发的小鼠炎症有一定的抗性。实验发现在石榴皮鞣素和安石榴苷的使用剂量都为5 mg/kg时，两者对验证的抵抗作用是相同的。随着安石榴苷剂量的增加，10 mg/kg的安石榴苷对炎症有58.15%的抑制率，但石榴皮鞣素的情况则有所不同，随着剂量的增加，其对炎症的抑制作用反而变弱。原因可能是石榴皮鞣素的毒性较安石榴苷大，增加用量的同时增加其对细胞的伤害，故出现抗炎作用减弱的现象。

主要参考资料

[1] 陈鹏, 周本宏. 石榴皮多酚类成分-石榴皮鞣素的研究进展[J]. 中国药师, 2017, 20(4): 720-724.

[2] 周本宏，易慧兰，郭咸希，等． HPLC-ESI-MS 对石榴皮中鞣质类化学成分的初步分析［J］．中国药师，2015，18(2):201-204

[3] 王燕． 石榴皮鞣素的分离纯化及活性研究［D］． 北京:北京化工大学硕士学位论文，2012