安石榴林的分离纯化

安石榴林是石榴皮中一种重要的鞣花单宁,据报道其具有抗氧化、抗肿瘤、抑制HIV-1病毒等多种药理活性。但是由于其在石榴皮中含量很低(约2%),分离纯化难度大、成本高,导致其价格昂贵,进而限制了其药理活性研究和应用开发进程。因此,寻求合适的提取、纯化方法以获取大量、高纯度的安石榴林并对其活性进行研究有着重要的意义。

分离纯化

1、优化了安石榴林的提取工艺：①硫酸水解法：硫酸浓度3%、水解温度100℃、水解时间5h、液料比12：1,安石榴林的产率高达8.91%。②闪式提取法：闪提电压为81V,闪提时间为1.83min,液料比为21.4：1,安石榴林的产率达到6.64%。综合比较发现,闪式提取法具有耗时短、效率高、易操作、成本低等优点,更加适合工业化生产。

2、确定了H-103树脂分离安石榴林的操作条件：将900ml浓度为4mg/ml、pH值为4.0的原料液以0.6BV/h的流速通过150mlH-103树脂层,以50%的甲醇在1BV/h的流速下进行洗脱,收集5BV的洗脱液,干燥后即可得纯度和产率分别为37.7%和83%的安石榴林粗品。

3、中压制备色谱(MPLC)纯化安石榴林：流动相为5%的甲醇水溶液,流速为80ml/min,上样量为1.0g,检测波长为269nm和378nm。在此条件下,安石榴林的纯度可达到95.89%,收率为90.04%,同时还可获得纯度为78.04%的没食子酸副产品。

4、安石榴林和BSA的相互作用研究：与安石榴苷相比,安石榴林具备较弱的BSA絮凝能力,它们与BSA的结合是疏水键和氢键联合作用的结果。安石榴林和安石榴苷复配后没有表现出显著的协同或拮抗絮凝BSA的作用。在啤酒澄清中,与安石榴林相比,安石榴苷表现出更好的清除蛋白质的能力。

5、安石榴林的活性研究：安石榴林有较好的DPPH、羟基自由基清除能力和较高的总还原力,表明其抗氧化性能很好。安石榴林还表现出较强的清除亚硝酸钠和抑制亚硝胺合成的能力。根据给药量实验可知,安石榴林粗品(20.26%)的给药量不得超过4.0g/kg。