嗜热脂肪地芽孢杆菌的制备及应用

背景及概述

嗜热脂肪地芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）属嗜热性需氧芽孢杆菌，但兼有厌氧的特性，细菌繁殖体G兰氏染色阳性呈紫色，细菌芽胞孔雀绿着色。嗜热脂肪地芽孢杆菌比较容易识别且对人体没有危害性，一般作为空间消毒的指示生物。

制备^[2]

嗜热脂肪地芽孢杆菌生长温度55～60℃，其所产芽孢无致病性、无热原、无毒，且对压力蒸汽的抵抗力在大多数微生物中最强，因此常被用作检查高压蒸汽灭菌消毒效果的指标菌。目前现有技术中制备嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢悬液的方法有固体和半固体培养 法，芽孢悬液通过固体或半固体培养基培养、洗脱、热处理、分离和定容而制得。该法存在诸多缺陷，如获得芽孢的培养时间较长，芽孢的提取费工费时，步骤较多，操作复杂。另外，在固体或者半固体培养基中，菌体生长空间有限，分布不均匀，生长缓慢，芽孢得率较低；现有技术中液体发酵方式操作步骤多，培养方式复杂。

为解决以上问题，CN201710765076.7提供了一种获得嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的方法，包括以下步骤：

S1：将嗜热脂肪地芽孢杆菌接种于液体种子培养基中，培养得到种子液；

S2：将所述种子液接种于液体产芽孢诱导培养基中进行诱导培养，诱导产生芽孢。

本发明中，种子细胞的培养和芽孢的诱导均在液体培养中进行，大大提高了培养和诱导的效率，缩短了时间，并且减少了人工操作，在36-48小时内即能得到高芽孢数和高芽孢得率。

应用 ^{[1] [3]}

一、制备抗病毒制剂和肥料

生物防治是控制植物病害的一种新途径，它主要是利用生防菌与植物病原微生物之间的拮抗作用，抑制植物病原菌的生长。微生物制剂中生防菌的种类、与病原微生物之间的拮抗作用大小是决定其抗病毒能力的关键，因此现在将寻找拮抗致病菌或致病害虫的高活性微生物及其代谢产物来预防和解决植物病毒病是目前的研究热点和突破口。微生物肥料在解决化学肥料所带来的问题上有独到的作用，并取得了良好的使用效果，将是我国农业技术发展的重点和依托。微生物肥料中有益微生物的种类、生命活动是否旺盛是其有效性的关键，寻找拮抗致病菌或致病害虫的高活性微生物及其代谢产物来预防和解决土传病害是目前微生物肥料的研究热点和突破口。

CN201310220129.9提供了一种嗜热脂肪地芽孢杆菌LJ-2及其在在制备抗病毒制剂和肥料中的应用。所述菌株LJ-2可抗真菌性病害，其次级代谢产物可抗病毒，亦可对三生NN烟产生系统抗性，应用于烟草专用肥中可以达到增产抗病的效果。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：一种嗜热脂肪地芽孢杆菌LJ-2，其分类命名为嗜热脂肪地芽孢杆菌 Geobacillus stearothermophilus，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中心，其保藏编号为：CGMCC No.7572。所述嗜热脂肪地芽孢杆菌LJ-2为短杆状，芽孢为圆形，芽孢端生，菌落边 缘不规则，菌落直径3.0mm-5.0mm，呈白色，粉质，干燥，无光泽，无凸起。所述嗜热脂肪地芽孢杆菌LJ-2发酵后去除菌体的发酵上清液能有效抑制烟草花叶病毒。

二、制备复合肥料

CN201610103577.4提供一种新型的复合肥料及其制备方法，其综合了有机肥料和无机肥料的优点，其能够提高化肥利用率、增加土壤有机质，具有安全、无污染、改善作物品质、增加农作物产量、保护土壤、减少化肥和农药使用量的显著特点。其原料包括有机肥料成分、无机肥料成分、嗜热脂肪地芽孢杆菌(LactobacillusPlantarum)添加剂、植物乳杆菌添加剂和中药添加剂。其中，所述复合肥料中各原料的重量份分别为有机肥料成分70～80重量份、无机肥料成分20～30重量份、嗜热脂肪地芽孢杆菌添加剂1～3重量份、植物乳杆菌添加剂1～3 重量份和中药添加剂15～25重量份。本发明提供的复合肥料综合了有机肥料和无机肥料的优点，能够提高化肥利用率、增加土壤有机质，具有安全、无污染、改善作物品质、增加农作物产量、保护土壤、减少化肥和农药使用量的显著特点。

主要参考资料

[1] CN201310220129.9 一种嗜热脂肪地芽孢杆菌LJ-2及其在制备抗病毒制剂和肥料中的应用

[2] CN201710765076.7 一种获得嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的方法

[3]CN201610103577.4 无污染的复合肥料及其制备方法