伐诺司林二盐酸盐的药物新用途

背景技术

原发性肝癌是危害人类健康的重要疾病之一，多次被我国政府列为研究和防治的重点。肝癌的治疗长期以来一种是一个世界性的难题。肝癌发病隐匿，患者就诊时多属中、晚期，而且肝癌是一种恶性程度高、浸润和转移性强以及极易耐药的恶性肿瘤，目前临床上治疗肝癌的化疗药物治疗效果都不是很理想，且外科手术治疗后存在70-90%的复发率，复发后的患者对化疗、放疗出现抵抗作用，因此寻找新型抗肝癌药物迫在眉睫。

细胞周期紊乱是恶性肿瘤形成的一个标志，细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)的激活与失活维持着细胞周期各时相有序进行。CDK2是G1过渡到S期的关键因子。抑制CDK2可以抑制肿瘤细胞的增生，为一个很好的肿瘤药物靶点。CDK4，6是G1前期的关键致癌因子，抑制CDK4，6可以抑制肿瘤细胞的增生，也为一个很好的肿瘤药物靶点，所以筛选出可抑制致癌因子CDK2，4，6活性的药物即可抑制抑制肿瘤细胞的增生，发挥抗肝癌的功效。

发明内容

本发明公开了将伐诺司林二盐酸盐作为抗肝癌药物的新用途，即将伐诺司林二盐酸盐作为抗肝癌的药物；

进一步的，所述的伐诺司林二盐酸盐为1-(2-[双(4-氟苯基)甲氧基]乙基)-4-(3-苯基丙基)呢嘆二盐酸盐(Vanoxerine dihydrochloride)。

进一步的，所述肝癌的致癌因子为CDK2，4，6。

进一步的，将1-(2-[双(4-氟苯基)甲氧基]乙基)-4-(3-苯基丙基)哌嗪二盐酸盐(Vanoxerine dihydrochloride)作为致癌因子CDK2，4，6的联合抑制剂。

为了更好的说明本发明的实质，下面结合实验例对本发明的研究做详细说明。

本发明通过计算机药物开发软件i dock针对致癌因子⑶K2，4，6从FDA注册过的药物数据库初筛出打分很高的9个化合物，然后通过实验室体内外实验验证其抗癌作用。实验室体内外实验包括如下几步:

1、idock软件筛选CDK2抑制剂的候选药物

从FDA认证的包括在dbap和fda目录下ZINC药物数据库中4，914个药物进行分析且依据绑定的亲和强度值进行排序。从中找出且购买到9个打分最高的化合物进行下一步的实验。它们分别是莫那匹尔、氟啶蜱脲、凯坦色林、酒石酸盐、他尼氟酯、度他雄胺、阿坦塞林、咪唑斯汀、伐诺司林二盐酸盐。

2、比较候选药物对应的IC50值

通过MTT实验首先检查了9个化合物的抗癌效果。这九个化合物分别都对肝癌细胞系QGY7703和Huh7有抗癌效果。用graphpad prime5软件计算出其IC50值，比较各化合物对应的IC50值，从而筛选出最有效的化合物伐诺司林二盐酸盐。伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞系QGY7703和Huh7及大肠癌细胞系LOVO和DLD1后，呈现时间(24，48，72小时)及剂量(3，10,30uM/L)依赖性抑制增加效果。

3、观察伐诺司林二盐酸盐对肝癌细胞干扰效果

为了观察伐诺司林二盐酸盐对肝癌细胞的抑制效果，通过用流式细胞术检测在不同浓度伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞QGY7703和Huh7 6，12，24小时后细胞周期分布情况，与对照组相比较，伐诺司林二盐酸盐大大的增加了停滞在G1期的细胞，且呈现时间及剂量依赖性增加的趋势(P〈0.05)，同时结果显示随着G1期细胞数量的增加同时伴随着S期细胞数量的减少。

4、评估伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞后引起的细胞凋亡结果

通过流式细胞技术检测伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞Huh7和QGY7703后，与对照组相比较伐诺司林二盐酸盐大大的增加了细胞的凋亡数量，且呈现时间及剂量依赖性增加的趋势(P〈0.05)。

5、伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞QGY7703和Huh7细胞后，CDK2，4，6，Rb，cyclinE, cyclinD, pho-Q)k2, pho-Rb，cycl inB 的蛋白表达量的变化情况

通过Western blotting实验伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞后G1期及G1期至S期转换相关蛋白CDK2,4,6,cyclinD/B,cyclinE,Rb,pho_CDk2 and pho-Rb进行检测。结果显示伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞Huh7和QGY7703后其CDK2 ,4,6,cyclinD,cyclinE，Rb，pho-CDK2和pho-Rb蛋白表达量呈现剂量依赖性下降趋势，cycl in B蛋白表达量没有改变。

有益效果:

本发明通过体外试验验证，伐诺司林二盐酸盐可抑制致癌因子⑶K2，4，6活性，具有强烈的抗肝癌的效果，伐诺司林二盐酸盐作为一种新型抗肝癌药物，可用于减缓肿瘤病情的发展，降低患者的痛苦，本发明也为研制能用于肝癌，大肠癌及其它恶性肿瘤治疗的药物提供了新的思路和技术储备。具体实施方式

本实施例为将伐诺司林二盐酸盐，S-1-(2-[双(4-氟苯基)甲氧基]乙基)-4-(3-苯基丙基)呢嘆二盐酸盐(Vanoxerine dihydrochloride)与其他辅助药品结合作为抗肝癌的药物。