MCF-7 人乳腺癌细胞的应用

背景^[1-3]

MCF-7人乳腺癌细胞是从一名69岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立的。该细胞保留了多个分化乳腺上皮的特性，包括：能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构（domes）；该细胞表达WNT7B癌基因；TNF-α可以抑制MCF-7细胞的生长；抗雌激素处理能调节细胞胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）的分泌。

MCF-7人乳腺癌细胞

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备MEM培养基；优质胎牛血清，10%；添加0.01mg/ml胰岛素；双抗1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

应用^[4][5]

用于生姜挥发油对人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞生长的影响研究

研究生姜挥发油（GEO）对人乳腺癌的影响,通过对MDA-MB-231及MCF-7细胞体内外增殖、迁移与凋亡的影响,探讨生姜挥发油对乳腺癌细胞凋亡的可能机制和途径。

生姜挥发油体外对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响方法:运用MTT法检测不同浓度生姜挥发油对乳腺癌细胞24小时、48小时和72小时的影响;Hoechst33258染色法检测生姜挥发油对乳腺癌细胞的影响;流式细胞仪和荧光共聚焦显微镜观察生姜挥发油对乳腺癌细胞凋亡的影响;实时荧光逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测生姜挥发油对人乳腺癌细胞凋亡基因Bax、Bcl-2基因表达的影响;酶联免疫吸附法分析生姜挥发油对乳腺癌细胞氧化反应的影响。

结果:通过噻唑蓝（MTT）法实验结果表明生姜挥发油可以显著降低人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞的活性,并且随着生姜挥发油含量浓度的增大和干预时间的增多,生姜挥发油对人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞的活性抑制越明显,呈一定时间-浓度量效关系;用倒置显微镜观察细胞的形状变化,与对照组相比,生姜挥发油（25、50、100、1500和200mg/L）作用48h后,MDA-MB-231和MCF-7细胞的生长速度和粘附力逐渐下降,且随着生姜挥发油浓度越高细胞之间的间隙增大越明显、细胞形态改变、缩小甚至凋零。

通过流式Annexin-FITC/PI双染法检测分析表明用生姜挥发油处理后的人乳腺癌MDA-MB-231细胞其凋亡率,随着生姜挥发油浓度不断增加也明显增加;细胞迁移试验结果与空白对照组相比,生姜挥发油可以明显降低人乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移性能;RT-PCR实验检测生姜挥发油作用MDA-MB-231细胞48h后,生姜挥发油组Bcl-2基因与Bax基因的扩增量比值显著比空白对照组低,各浓度中以200mg/L浓度的生姜挥发油差异;氧化指标检测结果显示生姜挥发油作用后的乳腺癌细胞MDA活性和LPO水平升高,CAT含量先降低,然后随浓度增加而升高。

结论:生姜挥发油能够体外抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的活性,引起细胞脂质过氧化物MDA,LPO的含量变化和下调Bcl-2并上调Bax基因的表达并诱导细胞凋亡。

生姜挥发油对环境雌激素BPA诱导的MCF-7乳腺癌细胞及肿瘤的影响方法:采用itraq标记法进行生姜油对乳腺癌细胞增殖抑制作用的蛋白组学定性定量分析;通过荷MCF-7裸鼠观察生姜挥发油在体内对肿瘤增殖的影响。

结果:人乳腺癌MCF-7细胞蛋白组学分析表明生姜挥发油可以降低双酚A引起的MCF-7乳腺癌细胞升高的增殖率,并且可能与SDHB,SDHC,COX-2,SOD2等氧化磷酸化通路蛋白有关。体内移植瘤实验表明,生姜挥发油可以明显抑制双酚A引起的MCF-7乳腺肿瘤的体积和大小,并且影响裸鼠的肠道菌群多样性及蛋白组学的变化。

参考文献

[1]iTRAQ-based proteomic analyses of the plant-pathogenic bacterium Acidovorax citrulli during entrance into and resuscitation from the viable but nonculturable state[J].Yumin Kan,Qingyang Lyu,Na Jiang,Sining Han,Jianqiang Li,Saul Burdman,Laixin Luo.Journal of Proteomics.2020(C)

[2]Combinatorial Effect of DCA and Let-7a on Triple-Negative MDA-MB-231 Cells:A Metabolic Approach of Treatment.[J].Sharma Praveen,Singh Sandeep.Integrative cancer therapies.2020

[3]Identification and Verification of the Main Differentially Expressed Proteins in Gastric Cancer via iTRAQ Combined with Liquid Chromatography-Mass Spectrometry.[J].Gao Zhihua,Wang Jiabao,Bai Yuru,Bao Jun,Dai Erqing.Analytical cellular pathology（Amsterdam）.2019

[4][10]-Gingerol Affects Multiple Metastatic Processes and Induces Apoptosis in MDAMB-231 Breast Tumor Cells.[J].Fuzer Angelina M,Martin Ana C B M,Becceneri Amanda B,da Silva James A,Vieira Paulo C,Cominetti Marcia R.Anti-cancer agents in medicinal chemistry.2019(5)

[5]雷丹.生姜挥发油对人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞生长的影响[D].江西中医药大学,2021.