卵磷脂胆固醇酰基转移酶试剂盒(LCAT)

背景^[1-3]

卵磷脂胆固醇酰基转移酶试剂盒(LCAT)用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）的含量。

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样本处理及要求

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

卵磷脂胆固醇酰基转移酶试剂盒(LCAT)

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于2型糖尿病患者血浆HDL亚类与LCAT和CETP水平的关系研究

研究2型糖尿病（type2diabetes,T2D）患者血浆高密度脂蛋白（highdensity lipoproteins,HDL）亚类分布与卵磷脂胆固醇酰基转移酶（lecithin-cholesterol acyltransferase,LCAT）和胆固醇酯转移蛋白（cholesteryl estertransfer protein,CETP）水平的关系。

方法：采用双向电泳-免疫印记法分析了103例非2型糖尿病患者及78例2型糖尿病患者HDL亚类的组成、含量及分布特征；全自动生化分析仪测定了两组人群的空腹血糖、血总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三脂（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoproteins cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoproteins cholesterol,LDL-C）、载脂蛋白AⅠ（apoprotein-AⅠ,apoAⅠ）、载脂蛋白B100（apoprotein-B100,apoB100）的含量；ELISA试剂盒测定LCAT和CETP的含量。

结果：1.2型糖尿病组血浆TC、apoB100、preβ1-HDL（P<0.01）、TG和HDL3b（P<0.05）含量较非2型糖尿病组显著升高，而preβ2-HDL、HDL2a、HDL2b、LCAT含量及apoAⅠ/apoB100比值较非2型糖尿病组显著降低（P<0.01）。相关性分析的结果显示，2型糖尿病患者血浆HDL-C与preβ1-HDL、HDL3b、HDL3a、HDL2a、HDL2b呈显著正相关（P<0.01）；apoAⅠ与HDL亚类呈显著正相关（P<0.01）；apoB100与HDL3a呈显著正相关（P<0.05）；apoAⅠ/apoB100与preβ1-HDL、preβ2-HDL、HDL3c、HDL3b、HDL2a、HDL2b呈显著正相关（P<0.01）；LCAT与HDL3a呈显著正相关（P<0.05）。TG与preβ1-HDL、HDL3c呈显著负相关（P<0.05）。

2.2型糖尿病患者血浆CETP浓度按四分位数分为4组：Ⅰ组<0.74μg/ml，0.74μg/ml≤Ⅱ组<1.02μg/ml，1.02μg/ml≤Ⅲ组<1.35μg/ml，Ⅳ组≥1.35μg/ml，Ⅲ组preβ1-HDL含量及Ⅳ组HDL3c含量较Ⅰ组显著升高（P<0.05），Ⅲ组及Ⅳ组TG含量较Ⅰ组显著降低（P<0.05）。2型糖尿病患者血浆LCAT浓度按四分位数分为4组：Ⅰ组<19.94μg/ml，19.94μg/ml≤Ⅱ组<33.23μg/ml，33.23μg/ml≤Ⅲ组<65.38μg/ml，Ⅳ组≥65.38μg/ml，Ⅲ组HDL-C水平、Ⅳ组HDL3a含量较Ⅰ组显著升高（P<0.05），Ⅳ组preβ1-HDL和HDL3c含量较Ⅰ组显著降低（P<0.05）。

结论：2型糖尿病患者HDL成熟代谢异常，CETP和LCAT水平影响HDL亚类的分布。

参考文献

[1]Elevated proportion of small,dense low-density lipoprotein particles and lower adiponectin blood levels predict early structural valve degeneration of bioprostheses.[J].Shetty Rahul,Girerd Nicolas,C?téNancy,Arsenault Benoit,Després Jean-Pierre,Pibarot Philippe,Mathieu Patrick.Cardiology.2012(1)

[2]Extended-release niacin/laropiprant effects on lipoprotein subfractions in patients with type 2 diabetes mellitus.[J].Bays Harold,Giezek Hilde,McKenney James M,O’Neill Edward A,Tershakovec Andrew M.Metabolic syndrome and related disorders.2012(4)

[3]Genetic variants of IDE-KIF11-HHEX at 10q23.33 associated with type 2 diabetes risk:a fine-mapping study in Chinese population.[J].Qian Yun,Lu Feng,Dong Meihua,Lin Yudi,Li Huizhang,Chen Jian,Shen Chong,Jin Guangfu,Hu Zhibin,Shen Hongbing.PloS one.2012(4)

[4]Association among retinol-binding protein 4,small dense LDL cholesterol and oxidized LDL levels in dyslipidemia subjects[J].Jia Wu,Yong-hui Shi,Dong-mei Niu,Han-qing Li,Chun-ni Zhang,Jun-jun Wang.Clinical Biochemistry.2012(9)

[5]周永强.2型糖尿病患者血浆HDL亚类与LCAT和CETP水平的关系[D].南华大学,2012.