MG-63 人成骨肉瘤细胞的应用

背景^[1-3]

MG-63人成骨肉瘤细胞源自14岁患有骨肉瘤的白人男性；聚次黄嘌呤核苷-聚胞嘧啶核苷酸、放线菌酮和放线菌素D可以诱导MG-63细胞产生高水平的干扰素。MG-63细胞表达TGF-β受体Ⅰ和Ⅱ。

MG-63人成骨肉瘤细胞

细胞培养步骤：

一．培养基及培养冻存条件准备

1）准备MEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于三氧化二砷对人成骨肉瘤细胞系MG-63趋化及粘附能力的影响研究

观察三氧化二砷对人成骨肉瘤细胞系MG-63迁移粘附及趋化能力的影响方法:常规培养人人成骨肉瘤细胞系MG-63;将骨肉瘤细胞分为三组对照:在实验组:加入浓度为1.0μmol/L的三氧化二砷溶液,将等体积浓度为15mg/L的5-氟尿嘧啶加入第二组,称为阳性对照组,第三组不放任何药物处理,只放入同等体积的培养液,称为阴性对照组;

1. 用细胞聚集实验方法来检测三个不同处理组骨肉瘤细胞之间的粘附能力大小；

2. 用层粘连蛋白实验来观察三个不同处理组骨肉瘤细胞与正常组织或细胞外基质的粘附能力的大小；

3. 骨肉瘤细胞的迁移和趋化能力用划痕实验及transwell小室法检测。采用SPSS17.0统计软件。计量资料以x±s表示,组间比较采用方差分析及LSD-t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

结果:振摇时间20min,40min,60min时,通过观察三个不同处理组前后骨肉瘤细胞聚集数量的变化,得出的骨肉瘤细胞的聚集指数分别为三氧化二砷处理组:0.24±0.030,0.47±0.059,0.59±0.070,阴性对照组的聚集指数为（0.14±0.011,0.18±0.015,0.22±0.023）而加入5-氟尿嘧啶的对照组的聚集指数为（0.16±0.012,0.20±0.024,0.33±0.23）,三个对照组的结果经统计学分析,证实有统计学意义,P<0.05,三氧化二砷组高于其他两组;

层粘蛋白Ln粘附实验表明MG-63细胞系在培养30min时三组测的吸光度统计分析结果无意义,P>0.05,在培养60min时及培养90min时测得的细胞吸光度分别为实验组:0.144±0.007,0.141±0.013,未经药物处理的阴性对照组为0.387±0.026,0.461±0.024,5-氟尿嘧啶处理的阳性对照组为0.363±0.035,0.513±0.034,P<0.05,证实有统计学意义,三氧化二砷组明显低于其他两组;

划痕损伤愈合实验表明48小时后实验组在迁移距离、迁移面积及迁移速率为192.3±16.7,91.9±9.1,4.00±0.35,显著低于5-氟尿嘧啶对照组（301.6±23.8,161.9±12.9,6.9±0.9）及阴性对照组（362.0±27.8,242.5±21.2,8.2±1.1）,证实有统计学意义,P<0.05;观察计数穿过transwell小室的骨肉瘤细胞数,得出的结果为:实验组、阳性对照组、阴性对照组迁移跨膜细胞数分别为（112±11）、（172±15）,（276±37）个,两两组间比较,P均<0.05,差异有统计学意义。

结论:1、体外实验表明,骨肉瘤细胞在经过加入三氧化二砷处理后,同质之间的粘附能力明显升高,肿瘤细胞之间更易聚集生长;而骨肉瘤细胞与其周围组织的亲和能力则明显受到抑制。

2、三氧化二砷在体外能降低骨肉瘤细胞分离、游走的能力;并且明显抑制骨肉瘤细胞向周围组织的趋化迁移能力。

参考文献

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[2]Use of Surface Wave Measurements to Characterize Surface-Breaking Cracks in Concrete Bridge Decks[J].Seong-Hoon Kee,Nenad Gucunski.Transportation Research Record.2014(1)

[3]Nanocrystalline Metallosilicate Modified Electrodes for the Simultaneous,Sensitive,and Selective Determination of Riboflavin,Rutin,and Pyridoxine[J].Balwinder Kaur,Rajendra Srivastava.Electroanalysis.2014(5)

[4]Involvement of leukotriene B 4 in dermatophyte-related itch in mice[J].Tsugunobu Andoh,Yusuke Takayama,Yasushi Kuraishi.Pharmacological Reports.2014

[5]岳龙.三氧化二砷对人成骨肉瘤细胞系MG-63趋化及粘附能力的影响[D].山西医科大学,2016.