NCI-H358人非小细胞肺癌细胞的应用

背景^[1-3]

NCI-H358人非小细胞肺癌细胞是于1981年从一位开始化疗之前的患者的肿瘤组织中分离得到的。超微结构研究表明，NCI-H358细胞的细胞质中有Clara细胞的特征结构，NCI-H358细胞表达主要的肺表面结合蛋白SP-A和RNA，不表达SP-B和SP-C；NCI-H358细胞在软琼脂中的克隆形成效率为0.83%。

NCI-H358人非小细胞肺癌细胞

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

应用^[4][5]

用于99mTc-RGD-4CK、99mTc-N（NOET）2、99mTc-MIBI与18F-FDG在荷NCI-H358肺癌裸鼠模型中的对比研究

建立NCI-H358人细支气管肺泡癌肿瘤细胞裸鼠移植瘤模型,分别使用18F-FDG、99mTc-MIBI、99mTc-N（NOET）2和99mTc-RGD-4CK这几种显像机制各不相同的肿瘤显像剂对荷瘤小鼠进行显像和生物分布研究,比较NCI-H358肿瘤细胞对不同显像剂的摄取并与18F-FDG进行对比,试图寻找诊断高分化肺肿瘤时敏感性更高的显像剂,降低18F-FDG显像的假阴性率。

方法:1建立动物模型:细胞株NCI-H358保存在含15%胎牛血清的RPMI-1640培养液中,置37℃体积分数5%CO2及饱和湿度培养箱内培养至所需浓度,收获指数生长期的细胞接种于BALB/C裸小鼠右前肢根部皮下,每只小鼠接种1×107/0.2ml,成瘤后隔日测量肿瘤最长径及与之垂直的最短径,待肿瘤径达0.7cm-1.0cm时,选取肿瘤生长良好、大小无显著性差异的荷瘤小鼠20只进行实验。

2分组显像和分布:将20只荷瘤小鼠随机分为a、b、c、d四组,每组5只,分别经尾静脉注射示踪剂18F-FDG、99mTc-MIBI、99mTc-N（NOET）2和99mTc-RGD-4CK,进行显像和体内生物分布研究。每只分别注射含7.4MBq（0.2mCi）/0.2ml显像剂,注药后120min腹腔注射10%水合氯醛麻醉小鼠并固定,行SPECT全身平面显像。在采集的平面图像上,以相同大小感兴趣区（ROI）获取肿瘤部位（T）和对侧肢体相应部位的放射性计数（NT）,计算T/NT放射性比值。图像采集结束后立即将裸小鼠眼球取血,脱颈处死,迅速分离其肿瘤、心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、骨、对侧肢体肌肉等脏器、组织,生理盐水洗涤后粘干、称重,置于试管中用γ井型探测仪测量各组织的放射性计数,同时取1%注射活度做18F或99mTc的衰减校正,计算各脏器的每克组织百分注入活度（%ID/g）,并进行统计学分析。

3病理学检查:各组中随机选取荷NCI-H358人非小细胞肺癌裸小鼠瘤体的切块,用4%多聚甲醛固定,48小时后,石蜡包埋,行常规HE染色、肺表面活性物质相关蛋白A（SP-A）免疫组织化学染色及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学染色。

参考文献

[1]11 C-acetate for positron emission tomography imaging of clinical stage IA lung adenocarcinoma:comparison with 18 F-fluorodeoxyglucose for imaging and evaluation of tumor aggressiveness[J].Hidekatsu Shibata,Hiroaki Nomori,Kimiichi Uno,Ken-ichi Iyama,Katsumi Tomiyoshi,Rumi Nakashima,Kazuya Sakaguchi,Tomoyuki Goya,Iwao Takanami,Kiyoshi Koizumi,Takashi Suzuki,Masahiro Kaji,Hirotoshi Horio.Annals of Nuclear Medicine.2009(7)

[2]11C-Acetate can be Used in Place of 18F-Fluorodeoxyglucose for Positron Emission Tomography Imaging of Non-small Cell Lung Cancer with Higher Sensitivity for Well-Differentiated Adenocarcinoma[J].Hiroaki Nomori,Hidekatsu Shibata,Kimiichi Uno,Kenichi Iyama,Yumi Honda,Rumi Nakashima,Kazuya Sakaguchi,Tomoyuki Goya,Iwao Takanami,Kiyoshi Koizumi,Takashi Suzuki,Masahiro Kaji,Hirotoshi Horio.Journal of Thoracic Oncology.2008(12)

[3]Diagnosis and Differentiation of Bronchioloalveolar Carcinoma from Adenocarcinoma with Bronchioloalveolar Components with Metabolic and Anatomic Characteristics Using PET/CT[J].Goudarzi,Behnaz,Jacene,Heather A,Wahl,Richard L.The Journal of Nuclear Medicine.2008(10)

[4]Bronchioloalveolar Lung Cancer[J].Douglas Arenberg.Chest.2007(3)

[5][1]张建阳.~（99m）Tc-RGD-4CK、~（99m）Tc-N（NOET）_2、~（99m）Tc-MIBI与~（18）F-FDG在荷NCI-H358肺癌裸鼠模型中的对比研究[D].河北医科大学,2010.