人肾上腺皮质细胞的应用

背景^[1-3]

人肾上腺皮质细胞是从人肾上腺皮质组织中分离得到的细胞系，该细胞可通过GFAP特异性抗体的免疫荧光鉴定。该细胞不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母菌和真菌。

肾上腺皮质是构成肾上腺外层的内分泌腺组织。它能分泌由数种类固醇混合而成的肾上腺皮质激素，皮质内还含有为数更多的类固醇。肾上腺皮质由3层构成，最外层为球状带（zona glomerulosa），接着为占大部分的束状带（zona fasciculata），内层为网状带（zona seticularis）。其功能异常可以引起肾上腺皮质功能亢进、肾上腺皮质功能减退、肾上腺皮质增生等。

人肾上腺皮质细胞

肾上腺皮质（adrenal cortex）球状带分泌盐皮质类固醇，束状带分泌糖皮质类固醇，网状带分泌肾上腺性激素。脑垂体前叶的促肾上腺皮质素具有促进肾上腺皮质的发育和分泌的作用，但球状带的活动则受血管紧张素Ⅱ的支配。肾上腺皮质通过这些激素的分泌，对物质代谢有重要关系，特别是参与机体对一切有害刺激的应激反应。另外，肾上腺皮质激素对脑及脑垂体都具有反馈作用，从而可调整促肾上腺皮质素释放因子和促肾上腺皮质素的分泌。这样，肾上腺皮质的调节系统便形成反馈回路。

肾上腺皮质区域与髓质区域之间有着广泛的联系，皮质细胞存在于髓质区域，而嗜铬细胞存在于皮质区域。这两种细胞的紧密联系说明细胞间存在交换，也使得对两种肾上腺内分泌系统之间旁分泌信号传导的深入研究提供了可能。

应用^[4][5]

用于顺式联苯菊酯对映体对H295R细胞肾上腺皮质激素分泌的选择性干扰效应研究

研究拟除虫菊酯类农药顺式联苯菊酯（cis-BF）对H295R细胞肾上腺皮质激素分泌的选择性干扰效应及其作用机制。

方法：利用高效液相色谱系统和手性色谱柱对cis-BF两对映体（1S-cis-BF和1R-cis-BF）进行拆分,并通过气相色谱系统和圆二色光谱仪对单个对映体分别进行定量分析和构型判定。选取H295R细胞为研究模型,将细胞暴露于不同浓度（0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L）1S-cis-BF/1R-cis-BF或1S-cis-BF/1R-cis-BF与8-Br-cAMP（500μmol/L）的混合物24 h,同时设置DMSO（0.1%,v/v）为溶剂对照组、8-Br-cAMP（500μmol/L）为阳性对照组。

用MTS法检测细胞增殖活性,确定染毒浓度。用ELISA法检测细胞上清液中皮质醇、醛固酮水平和细胞内cAMP含量,并用RT-qPCR法分析类固醇激素合成相关酶（StAR、P450scc、3βHSD2以及CYP17）mRNA的表达水平。

结果cis-BF两对映体在高效液相色谱系统和手性色谱柱上成功得到分离,且1S-cis-BF和1R-cis-BF纯度均在99%以上。MTS结果显示,高浓度（1、10μmol/L）1S-cis-BF/1 R-cis-BF对细胞增殖活性有刺激作用（P<0.05）,因此本研究选择无细胞毒性浓度（0.001、0.01、0.1μmol/L）为cis-BF对映体的染毒浓度。激素测定结果显示,与溶剂对照组相比,0.001、0.01、0.1μmol/L 1S-cis-BF/1R-cis-BF均显著降低本底皮质醇分泌水平（P<0.05）,且1S-cis-BF对本底皮质醇分泌的抑制作用分别是1R-cis-BF的1.49、1.68和1.04倍,0.001、0.1mol/L 1S-cis-BF与0.1μmol/L1R-cis-BF均明显降低本底醛固酮分泌水平（P<0.05）,在0.1μmol/L浓度组1S-cis-BF对本底醛固酮分泌的抑制作用是1R-cis-BF的2.16倍,具有显著的对映体差异（P<0.05）;与阳性对照组相比,1S-cis-BF对8-Br-cAMP诱导的皮质醇和醛固酮分泌水平随着浓度的增加而降低,而1R-cis-BF对8-Br-cAMP诱导的皮质醇和醛固酮分泌水平无明显改变,两对映体染毒组激素水平变化无显著性差异。

RT-qPCR结果显示,与溶剂对照组相比,0.1μmol/L 1S-cis-BF显著下调本底StAR、P450scc、3βHSD2和CYP17 mRNA表达水平（P<0.05）,0.01、0.1μmol/L 1R-cis-BF显著下调本底3βHSD2 mRNA表达水平（P<0.05）,且在0.1μmol/L浓度组,1S-cis-BF对本底StAR、3βHSD2和CYP17 mRNA表达水平的抑制作用分别是1R-cis-BF的2.23、2.04和5.00倍,具有显著的对映体差异（P<0.05）;与阳性对照组相比,随着浓度的升高,1S-cis-BF对8-Br-cAMP诱导的StAR、P450scc、3βHSD2和CYP17mRNA表达水平的抑制作用越明显,其中在0.1μmol/L浓度组3βHSD2和CYP17 mRNA表达下调幅度有统计学差异（P<0.05）,而1R-cis-BF对8-Br-cAMP诱导的此四种基因的表达有下调趋势,但差异没有统计学意义,两对映体染毒组四种酶基因转录水平无统计学差异。

cAMP测定结果显示,与对照组相比,0.1μmol/L 1S-cis-BF染毒致细胞内cAMP含量降低了8.10%（P<0.05）,0.1μmol/L 1R-cis-BF处理组细胞内cAMP含量略有降低,但差异没有显著性,且在0.1μmol/L浓度组,1S-cis-BF的抑制作用是1R-cis-BF的1.95倍,具有显著的对映体差异（P<0.05）。

参考文献

[1]Organotin exposure stimulates steroidogenesis in H295R Cell via cAMP pathway[J].Xueting Yan,Bin He,Lihong Liu,Guangbo Qu,Jianbo Shi,Chunyang Liao,Ligang Hu,Guibin Jiang.Ecotoxicology and Environmental Safety.2018

[2]Stereoselective degradation and thyroid endocrine disruption of lambda-cyhalothrin in lizards（Eremias argus）following oral exposure[J].Jing Chang,Weiyu Hao,Yuanyuan Xu,Peng Xu,Wei Li,Jianzhong Li,Huili Wang.Environmental Pollution.2018

[3]Allethrin toxicity causes reproductive dysfunction in male rats[J].Golla Madhubabu,Suresh Yenugu.Environmental Toxicology.2017(6)

[4]Acute exposure to synthetic pyrethroids causes bioconcentration and disruption of the hypothalamus–pituitary–thyroid axis in zebrafish embryos[J].Wenqing Tu,Chao Xu,Bin Lu,Chunmian Lin,Yongming Wu,Weiping Liu.Science of the Total Environment.2016

[5]王春蕾.顺式联苯菊酯对映体对H295R细胞肾上腺皮质激素分泌的选择性干扰效应[D].浙江省医学科学院,2020.