单克隆抗体制备的应用

背景^[1-3]

单克隆抗体制备是将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞进行细胞融合，获得既能产生抗体，又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体。

原理是:B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂;而瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后得到的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性。免疫反应是人类对疾病具有抵抗力的重要因素。当动物体受抗原刺激后可产生抗体。

单克隆抗体制备

抗体的特异性取决于抗原分子的决定簇，各种抗原分子具有很多抗原决定簇，因此，免疫动物所产生的抗体实为多种抗体的混合物。用这种传统方法制备抗体效率低、产量有限，且动物抗体注入人体可产生严重的过敏反应。此外，要把这些不同的抗体分开也极困难。近年，单克隆抗体技术的出现，是免疫学领域的重大突破。

单克隆抗体技术的流程为：脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)作用下发生细胞融合；加入HAT选择培养基(含H、A和T)后，未融合的骨髓瘤细胞因其从头合成途径被氨基蝶呤阻断，而又缺乏HGPRT不能利用补救途径合成DNA，从而死亡；未融合的脾细胞难以在体外培养而死亡；融合细胞因从脾细胞获得HGPRT，故可在HAT选择培养基中存活和增殖。

特点：一是特异性，针对特定的单一抗原表位，它具有高度的特异性，抗肿瘤抗体药物的研究表明，其特异性主要表现为特异性结合、选择性杀伤靶细胞、体内靶向性分布以及具有更强的疗效。

二是多样性，主要表现在靶抗原的多样性、抗体结构的多样性、作用机制的多样性等方面。

三是定向性，抗体药物可以定向制造，就是根据需要制备具有不同治疗作用的抗体药物。基于这些特点，我们可以用来制成“生物导弹”运送药物至病害部位，主要是癌细胞，从而达到治疗效果。

应用^[4][5]

用于重金属与微囊藻毒素单克隆抗体制备和快速检测技术研究

采用免疫学原理,制备重金属铅、镉、汞、铜和藻毒素单克隆抗体并开发免疫快速检测技术,并应用于饮用水和粮食的检测。

首先,成功合成了重金属免疫原和包被抗原并用于免疫和检测,分别获得有效果的小鼠。通过细胞融合,筛选和间接竞争ELISA方法优化,获得B5-D6细胞株分泌的antiPb-ITCBE抗体亲和力常数是1.02?109 L/mol,半数抑制率IC50达到1.3 ng/m L。H7-A11细胞株分泌的anti-Cd-EDTA抗体亲和力常数是1.1?1010 L/mol,半数抑制率IC50达到1.8 ng/m L。

F6-G3细胞株分泌的anti-Hg-EDTA抗体亲和力常数是1.65?109 L/mol,半数抑制率IC50达到4.8 ng/mL。C5-B11细胞株分泌的anti-Cu-EDTA抗体亲和力常数是1.26?109 L/mol,半数抑制率IC50达到3.9 ng/m L。在所筛选的重金属单克隆抗体基础上,建立了饮用水和自来水中四种重金属离子ELISA检测方法,添加回收率在84.3111.0%之间,批内变异系数（n=3）小于10%,批间变异系数（n=3）在6.3%10.7%之间。

成功开发了重金属铅,镉,汞和铜的胶体金试纸条,并用于饮用水和自来水的检测。试纸条LOD分别为2 ng/m L,0.5 ng/m L,1 ng/m L和2.5 ng/mL,cut-off值为10 ng/mL,2 ng/m L,10 ng/m L和10 ng/mL。建立了大米中镉简单,快速的固液萃取方法,开发了大米中镉定量检测试纸条,最低检测限可达0.02 mg/kg。

并应用于实际样品的检测,和ICP-MS检测结果相比较,相关系数达到0.95。成功制备了藻毒素单克隆抗体,开发了胶体金试纸条应用于自来水和太湖水中藻毒素的检测,cut-off值为1 ng/mL,并开发了同时检测重金属铅和藻毒素等多种污染物试纸条。

参考文献

[1]An ultrasensitive immunochromatographic assay for non-pretreatment monitoring of chloramphenicol in raw milk[J].Naifeng Xu,Liguang Xu,Wei Ma,Liqiang Liu,Hua Kuang,Chuanlai Xu.Food and Agricultural Immunology.2015(5)

[2]Development of an anti-chlorothalonil monoclonal antibody based on a novel designed hapten[J].Liqiang Liu,Huijuan Yan,Xun Zhang,Hua Kuang,Chuanlai Xu.Food and Agricultural Immunology.2015(3)

[3]Heavy metal pollution in surface water and sediment:A preliminary assessment of an urban river in a developing country[J].Md Saiful Islam,Md Kawser Ahmed,Mohammad Raknuzzaman,Md Habibullah-Al-Mamun,Muhammad Kamrul Islam.Ecological Indicators.2015

[4]Management of Used Lead Acid Battery in China:Secondary Lead Industry Progress,Policies and Problems[J].Xi Tian,Yu Gong,Yufeng Wu,Amma Agyeiwaa,Tieyong Zuo.Resources,Conservation&Recycling.2014

[5]邢常瑞.重金属与微囊藻毒素单克隆抗体制备和快速检测技术研究[D].江南大学,2016.