人羊膜上皮细胞的应用

背景^[1-3]

人羊膜上皮细胞提取于人羊膜组织，于原代冻存。每管含有细胞数>5×105 cells/ml，此细胞通过Cytokeratin-18,Cytokeratin-19和Vimentin免疫荧光染色验证，经测试不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

人羊膜是由上皮细胞层，基底膜和无血管基质组成。羊膜上皮细胞是在受精后的第8天由外胚层形成。由于其为胚胎来源，羊膜上皮细胞缺少主要的组织相容性抗原，这点已用于异基因移植来治疗病人的溶酶体疾病。

人羊膜上皮细胞

研究表明，羊膜上皮细胞具有多种功能，例如：合成和释放乙酰胆碱和儿茶酚胺，同时，表达编码多巴胺受体和多巴胺转运蛋白的信使RNA。它们表达神经元和神经胶质细胞的标记物并形成基本的纤维母细胞生长因子，肝细胞生长因子和β转运生长因子。人类羊膜上皮细胞被认为是研究多巴胺释放和摄取过程、受体信号转导和开发作用于这些受体的新药物的合适的人的细胞模型。

产品的运输和保存:

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

应用^[4][5]

用于人羊膜上皮细胞移植对大鼠子宫内膜损伤的修复及机制研究

人羊膜上皮细胞（hAECs）是一种来自胎盘内侧羊膜的围产期干细胞,可以分化为三个胚层,显示出多能干细胞的特性,分化能力较强。hAECs是从胎盘分离,收集方法避免了道德伦理上的顾虑,且每个胎盘可提取超过一亿个细胞;hAECs缺乏端粒酶活性,不会致癌。因此,hAECs为一种安全、理想且来源广的干细胞来源。前期研究中,hAECs已经应用于多个领域,如神经系统损伤的修复,肝纤维化及肺纤维化的修复,原发性卵巢功能不全及心肌梗死的治疗等。探讨hAECs移植治疗大鼠子宫内膜损伤的疗效及可能涉及的作用机制,为IUA的临床治疗提供理论依据。

人羊膜上皮细胞的分离、提取、培养、鉴定及体外标记目的:建立hAECs分离、提取及培养方法,探究hAECs的表型特点;PKH26标记hAECs并观察其对细胞增殖活性的影响。

方法:（1）从人胎盘羊膜中分离并且提取hAECs,然后用含12%浓度胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养基来进行hAECs的培养。

（2）通过流式细胞术以及免疫荧光术来检测hAECs的表型特点,从而对提取培养的原代hAECs进行鉴定。

（3）用PKH26标记hAECs后,通过流式细胞仪来检测hAECs的标记率,通过CCK-8法来检测被PKH26标记后的hAECs的增殖活性。

结果:（1）提取的原代hAECs在接种72h后,60%-70%的hAECs已贴壁,呈圆点状/短梭状,后细胞逐渐地融合成片,并呈现出铺路石样的形态;约9-12d后,hAECs铺满瓶底的90%-100%可进行首次传代。

（2）第1代hAECs表达OCT4、SSEA4、NANOG、CK18、CD324、CD29和CD166,不表达HLA-DR、HLA-DQ、CD146、CD34和CD45,证明所培养细胞为hAECs。

（3）PKH26标记后的hAECs呈红色荧光,细胞标记率为96.95±3.05%;CCK-8结果表明与未标记的hAECs相比,PKH26标记后的hAECs的细胞增殖活性没有显著性改变。

结论:从羊膜分离、提取可获得活性较好且表型稳定的hAECs;PKH26标记hAECs方法较稳定,标记率较高,且并不影响hAECs的增殖活性,是追踪hAECs在体内的迁移、分布及定植的一个有效方法。